Abstract FR:

Hu est la proteine affine a l'adn la plus abondante chez e. Coli qui reconnait une structure particuliere de l'adn. En se liant a l'adn elle modifie la conformation de l'adn, ce faisant elle intervient dans de nombreux mecanismes moleculaires essentiels pour la survie de la bacterie. Hu est tres conservee et existe sous trois formes dimeriques (, 2 et 2) associees a une phase de croissance bien precise. Nous avons developpe un systeme pour optimiser la surproduction et la purification des dimeres sous leur forme native depourvue de contamination nucleasique. Nous avons determine les caracteristiques de liaison de 2 et 2 pour differentes structures d'adn et nous les avons comparees a celles obtenues pour. Si 2 presente les memes caracteristiques de liaison que , 2 se differencie dans ces interactions avec l'adn par rapport a 2 et 2. Les dimeres 2 et presentent une grande affinite pour l'adn cruciforme et les adns contenant un nick et un gap et tres peu d'affinite pour un adn double-brin. 2 quant a lui, se fixe preferentiellement a l'adn cruciforme. Cette etude comparative des proprietes de liaison des dimeres nous a permis aussi de montrer que 2 et 2 reconnaissent preferentiellement, comme , une conformation particuliere dans l'adn plutot qu'une sequence. Nous avons ainsi mis en evidence chez les trois dimeres deux modes de fixation : une interaction non-specifique se transformant en une interaction hautement specifique quand hu rencontre une structure d'adn. Nous avons mis en evidence les modalites de ces deux modes de fixation. Les experiences de mutagenese nous ont permis de cibler le domaine de la proteine responsable de la fixation structure-specifique et l'amino-acide responsable de la reconnaissance par hu d'une structure d'adn. D'autre part, en generant et purifiant deux proteines hybrides, nous avons mis en evidence que l'interaction non-specifique a l'adn se fait uniquement par l'intermediaire des bras de la proteine.