Abstract FR:

La quasi-totalite des proteines d'interet economique est constituee de proteines extracellulaires dont l'un des elements essentiel de stabilite et de repliement est la presence de ponts disulfure. Les strategies utilisees pour la production recombinante de ces proteines impliquent leur expression dans le periplasme de bacteries hotes. Dans le periplasme d'e. Coli, les enzymes du systeme dsb catalysent la formation et l'isomerisation des ponts disulfure. Dans des conditions d'expression normale, elles permettent le repliement correct des proteines naturelles. En revanche, la surexpression de proteines heterologues dans le periplasme conduit souvent a l'agregation ou a la degradation des proteines, en raison de l'accumulation de formes a ponts disulfure non formes ou non natifs. L'amelioration par ingenierie des proprietes de ces catalyseurs s'avere donc essentielle pour la production en grande quantite de proteines correctement repliees. Dsba, le principal agent de controle du potentiel oxydoreducteur periplasmique, constitue une cible ideale pour ce type d'etude. Afin de mieux comprendre ses proprietes catalytiques, l'etude de ses caracteristiques structurales et dynamiques a fait l'objet de ce travail. Dans la premiere partie, l'etude structurale comparative des formes oxydee et reduite a permis d'identifier les differences d'environnement electronique entre ces deux etats redox. Dans la seconde partie, l'etude d'un complexe covalent entre dsba et un peptide substrat a fourni une description detaillee des interactions entre les deux partenaires. Enfin, la mobilite au sein des trois formes (oxydee, reduite, complexee) a ete etudiee par la technique d'echange proton-deuterium. Au contraire de la structure, qui apparait tres similaire dans les differentes formes, la flexibilite de dsba varie largement entre les trois formes. Les informations obtenues au cours de cette etude fournit les elements de base pour la conception de nouveaux catalyseurs derives de dsba.