Abstract FR:

Nous avons etudie l'evolution des pools calciques intracellulaires ainsi que le couplage fonctionnel entre le reticulum sacro(endo)plasmique et les mitochondries au cours de la culture primaire des cellules musculaires lisses d'aorte de rat (rasmc). Les mesures de la concentration en ca 2 + intracellulaire ont ete effectuees en utilisant le fura-2 et differents decouplants mitochondriaux ont ete utilises pour evaluer l'implication des mitochondries. L'expression des pompes calciques du reticulum sarco(endo)plasmique, serca 2a et serca 2b, et des canaux calciques, le recepteur de la ryanodine (ryr) et le recepteur de l'inositol 1,4,5 trisphosphate (rip3), a ete analysee par rt-pcr et par immunofluorescence. Des anticorps specifiques des isoformes de la chaine lourde de la myosine ont ete utilises comme indicateurs de l'etat de differenciation des cellules, alors que les anticorps diriges contre pcna etaient employes comme marqueurs de proliferation. Serca 2a, serca 2b, ryr3 et rip3-1 essentiellement, etaient presents dans l'aorte in situ et dans les rasmc fraichement isolees. Ces cellules utilisaient les deux types de canaux calciques pour liberer le ca 2 + a partir d'un compartiment sensible a la thapsigargine qui n'etait pas couple aux mitochondries. La proliferation des rasmc, induite par le serum ou par le pdgf-bb, a ete accompagnee d'une disparition de serca 2a et de ryr au niveau des arnm et des proteines, ainsi que d'une perte du pool sensible a la cafeine et a la ryanodine. Le phenotype differencie et non proliferatif est reapparu au stade de la confluence et s'est maintenu lorsque les cellules ont ete cultivees a faibles concentrations en serum ou a forte densite. Dans ces conditions, ryr et serca 2a etaient egalement presentes dans les rasmc. Dans les cellules confluentes, les decouplants mitochondriaux ont inhibe la liberation de ca 2 + induite par la cafeine, suggerant qu'une partie du reticulum sacro(endo)plasmique etait couple aux mitochondries a ce stade.