Abstract FR:

La proteine ubiquitaire eps15 a ete initialement decrite comme un substrat de phosphorylation du recepteur de l'egf, mais sa fonction n'est pas etablie. Notre travail suggere son role possible dans l'endocytose. En effet, un nouvel anticorps monoclonal specifique de la proteine eps15, coimmunoprecipite un complexe de proteines identifiees par microsequencage et par leur immunoreactivite avec les adaptines du complexe ap-2, un composant des puits recouverts qui joue un role central dans les phases precoces l'endocytose. Nous avons montre que cette association est constitutive et qu'elle est ubiquitaire et conservee au cours de l'evolution puisque detectable dans tous les types cellulaires etudies, aussi bien chez l'homme que chez la souris. Pour mieux comprendre la fonction de l'association entre eps15 et ap-2, nous avons determine les sites d'interaction de ces proteines par precipitation a l'aide de proteines de fusion. Le complexe ap-2 se lie a un domaine de 72 acides amines (residus 667-739) du domaine cooh-terminal de eps15. Ce domaine ne partage aucune homologie de sequence avec des proteines connues y compris avec eps15r, une proteine tres homologue a eps15. Nous avons egalement montre que eps15 se lie a l'extremite cooh-terminale de l'une des sous-unites du complexe ap-2, l'alpha-adaptine, dans un domaine tres specifique du complexe ap-2 dont la fonction n'est pas elucidee. Nos resultats sont a rapprocher de l'identification recente chez la levure de la proteine end3p, dont le domaine n-terminal presente une forte homologie avec celui de eps15 et joue un role indispensable dans les phases precoces de l'endocytose. Dans leur ensemble, ces donnees suggerent que eps15 pourrait jouer un double role dans l'endocytose, d'une part a travers son domaine nh2-terminal homologue a celui de end3p, d'autre part a travers son domaine cooh-terminal unique capable de s'associer au complexe ap-2