Abstract FR:

Mon travail de these s'est inscrit dans le cadre de l'etude, chez la levure saccharomyces cerevisiae, d'un processus commun a toutes les cellules eucaryotes : le transport intracellulaire des proteines au sein de la voie biosynthetique/secretoire. Les petites proteines g arf sont des regulateurs importants du trafic intracellulaire. Elles basculent d'une forme inactive liee au gdp a une forme active liee au gtp sous l'action de facteurs d'echange. Nous avons identifie, par une approche genetique, une proteine (gea1p) catalysant l'echange gdp-gtp sur arf in vitro. Cette proteine possede un domaine d'environ 200 acides amines appele domaine sec7. Ce domaine est le domaine catalytique d'echange sur arf. Chez la levure, seules trois proteines possedent ce domaine : gea1p, gea2p (qui est fonctionnellement interchangeable avec gea1p) et sec7p. La brefeldine a (bfa) est une drogue lipophile qui perturbe tres fortement les structures membranaires et bloque le trafic intracellulaire dans toutes les cellules eucaryotes. Nous avons etabli que les proteines a domaine sec7 constituent les cibles majeures de la brefeldine a chez la levure. Nous avons identifie le domaine responsable de la sensibilite a la drogue (le domaine sec7 lui-meme) et avons pu montrer le role crucial de certains residus de ce domaine pour la sensibilite a la bfa. De plus, pour la premiere fois, nous avons etabli quel est le mecanisme moleculaire d'action de cette drogue : la bfa stabilise un complexe abortif domaine sec7-arf-gdp. Nous avons ensuite etudie les roles respectifs des differentes proteines a domaine sec7 dans la voie secretoire. En etudiant le phenotype de mutants conditionnels des differents genes, nous avons pu etablir que les proteines gea et sec7 possedent au moins chacune une fonction essentielle et qu'il existe, en plus, une fonction commune precoce dans la voie biosynthetique/secretoire partagee par sec7p et gea1/2p.