Transcriptional regulation of the IgH locus during class switch recombination
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Abstract EN:
Immunoglobulin (Ig) class switch recombination (CSR) takes place at the immunoglobulin heavy chain (IgH) constant locus upon B cell activation and results in a change of the isotype expressed. CSR is triggered by activation-induced cytidine deaminase (AID) and is dependent on inducible long-rangeenhancer/promoter looping and on germline transcription, which are controlled by the Eμ enhancer and the 3' regulatory region (3'RR) super-enhancer. Here, we characterize the role on switch transcription and recombination of g1E, a region located downstream of the Cg1 gene that bears marksof active enhancers and that interacts dynamically with both IgH enhancers upon B cell activation. We show that g1E deletion reduces CSR efficiency to IgA in CH12 cells and affects germline transcription and CSR in an isotype-specific manner in mice. On the other hand, whether transcription precedes orfollows looping to induce CSR is still unknown. To address this question, we targeted a transcriptional induction system based on the CRISPR/Cas9 technology to the Cg1 promoter in a background deficient for transcription and looping to study whether CSR could be restored.
Abstract FR:
La commutation isotypique (CI) des immunoglobulines (Ig) a lieu au locus constant de la chaîne lourde (IgH) de l'immunoglobuline lors de l'activation des cellules B et entraîne un changement de l'isotype exprimé. La CSR est déclenchée par l’enzyme AID et dépend des boucles à longue portée entre enhancers et promoteurs et de la transcription non-codante, qui sont contrôlés par l’enhancer Eμ et le super-enhancer de la région régulatrice 3' (3'RR). Ici, nous caractérisons le rôle sur la transcription non-codante et la CI de g1E, une région située en aval du gène Cg1 qui porte de marques d'enhancers actifs et qui interagit dynamiquement avec les deux enhancers du locus lors de l'activation des cellulesB. Nous montrons que la suppression de g1E réduit l'efficacité de la CI vers IgA dans les cellules CH12 et affecte la transcription non-codante et la CI d'une manière spécifique à l'isotype chez la souris. D'autre part, si la transcription précède ou suit la formation de la boucle pour induire la CI est encore inconnue. Pour répondre à cette question, nous avons ciblé un système d'induction transcriptionnelle basé sur la technologie CRISPR/Cas9 au promoteur Cg1 dans un contexte dépourvu de transcription et boucle pour étudier si la CI pouvait être restaurée.