Abstract FR:

L'étude de l'ATPase pompe à protons (H#+-atpase) du tonoplaste d'acer pseudoplatanus a nécessité la mise au point d'une nouvelle méthode pour l'isolement des vacuoles. Les vacuoles sont préparées à partir des protoplastes; la rupture du plasmalemme est obtenue par ultracentrifugation des protoplastes à l'intérieur d'un gradient discontinu de densité. Deux populations de vacuoles distinctes par la densité et par la taille sont ainsi séparées. La méthode proposée permet en une seule étape d'isoler les vacuoles avec un rendement élevé (50%) et un bon degré de pureté. La contamination par les autres compartiments cellulaires n'excède pas 5%. Le tonoplaste préparé à partir de ces vacuoles constitue donc un bon matériel pour l'étude de ses constituants et de l'H#+-ATPase en particulier. Les propriétés de l'H#+-ATPase du tonoplaste d'acer ont été caractérisées tant du point de vue de l'hydrolyse de l'ATP que du transport des protons. Comme les autres ATPases tonoplastiques, elle a un PH optimum de 7,3 et MGATP#2# est son substrat. Elle est sensible aux anions: stimulée par CL#, inhibée par NO#3#. Elle se distingue toutefois des autres ATPases tonoplastiques par sa sensibilité au vanadate (inhibiteur non-compétitif; I#5#0=10 M). Le vanadate est un composé décrit comme un inhibateur spécifique de l'ATPase plasmique des plantes et des animaux et des ATPases à intermédiaire phosphorile. Cette propriété de l'ATPase du tonoplaste d'acer suggère que son mécanisme réactionnel pourrait faire intervenir un intermédiaire phosphoryle au cours de l'hydrolyse de l'ATP.