Abstract FR:

L'antigene cd9 est une glycoproteine de surface ayant 4 regions transmembranaires appartenant a la superfamille des tetraspanines. La fonction de ces molecules n'est actuellement pas connue mais elles semblent jouer un role dans les phenomenes d'adherence, de migration et d'activation cellulaire. Certaines tetraspanines sont egalement des antigenes associes aux tumeurs dont le niveau d'expression est inversement correle a la progression tumorale. Nous avons aborde l'etude du cd9 et des tetraspanines selon trois axes differents. Nous avons apprehende la fonction des tetraspanines in vitro par des methodes biochimiques ainsi que par l'etude des effets induits par les anticorps monoclonaux. Nous avons entrepris ensuite l'etude de la regulation de l'expression de l'antigene cd9. Enfin, nous avons realise l'inactivation genique du cd9 par recombinaison homologue afin de caracteriser la fonction du cd9 in vivo. Les etudes biochimiques que nous avons menees ont montre que les tetraspanines s'associent entre elles ainsi qu'aux integrines 1 et aux antigenes hla-dr. Ces etudes ont conduit a l'hypothese de l'existence d'un reseau de tetraspanines present a la surface des cellules. Son role, en connectant certaines molecules, pourrait etre d'organiser la surface membranaire et de coupler certaines voies de signalisation. Le fait que les anticorps monoclonaux diriges contre differentes tetraspanines produisent des effets similaires sur la costimulation, l'adherence ou la migration cellulaire renforce cette hypothese. Au sein de ce reseau, chaque tetraspanine pourrait jouer un role specifique en connectant une molecule particuliere. Dans ce sens, nous avons observe que l'augmentation de la sensibilite a la toxine diphterique apres transfection de cellules sensibles par le cd9 est un phenomene specifique de cet antigene. En effet, ni le cd81, ni le cd82 n'induisent de variation de sensibilite. Dans la lignee hel, nous avons caracterise le promoteur minimal du gene qui s'etend sur 52 pb et possede une activite basale importante. Utilisant les cellules k562 traitees par le tpa comme modele de differenciation megacaryocytaire, nous avons montre que l'expression du cd9 est fortement augmentee et que ce phenomene precede l'expression des autres marqueurs megacaryocytaires comme l'integrine gpiib/iiia. Nous avons ensuite demontre que l'effet du tpa dans les cellules k562 se produisait via un element de reponse situe dans le promoteur minimal. Afin d'inactiver l'expression du cd9, nous avons base notre strategie de recombinaison homologue sur l'etude du promoteur, et nous avons choisi d'eliminer l'exon 1 ainsi que la partie proximale de la region 5 bordante. Nous avons clone le gene murin, produit des cellules es avec un allele recombine, obtenu des souris chimeres puis des souris homozygotes cd9 negatives. Les souris cd9 negatives sont viables et ne presentent pas de malformations majeures. En revanche, la fertilite des femelles est reduite ce qui suggere que le cd9 joue un role dans l'oogenese ou au cours des stades precoces du developpement embryonnaire. Les souris cd9 negatives possedent des plaquettes et ne presentent pas de syndrome hemorragique en depit de l'expression precoce du cd9 dans la lignee megacaryocytaire et de sa forte expression sur les plaquettes normales. Ces observations laissent entrevoir des phenomenes de redondance ou de compensation au sein de la famille des tetraspanines. Ces phenomenes pourront etre apprehendes par la generation de mutants doubles et conditionnels. Dans ce but, nous avons produit, a l'aide du systeme cre/lox-p, des cellules es presentant un allele cd9 floxe qui permettront de realiser des mutants conditionnels.