Abstract FR:

L'efficacite du transfert de genes non viral est limitee par les barrieres physiologiques qui entravent le cheminement de l'adn jusqu'au noyau des cellules cibles. Ce travail a permis de concevoir et d'etudier trois outils visant a ameliorer cette efficacite. Un premier volet concerne le ciblage du noyau cellulaire. Une banque de plasmides comportant une sequence aleatoire a ete construite dans le but d'identifier une sequence nucleotidique permettant l'interaction du plasmide avec une proteine karyophile qui pourrait l'escorter jusqu'au noyau cellulaire. Le caractere aleatoire de la banque a ete valide mais les sequences recherchees n'ont pas pu etre identifiees grace aux tests que nous avons employes. Le peptide de localisation nucleaire ibb de l'importine a ete couple de facon covalente au squelette d'un plasmide dans le but de promouvoir la fixation du plasmide aux proteines recepteurs d'import nucleaire. La specificite de l'interaction entre ce plasmide-ibb et les recepteurs cellulaires n'a pas pu etre demontree, les tests employes n'ont pas permis de mettre en evidence un import nucleaire accru de ces plasmides. En revanche le peptide ibb compacte l'adn, ameliorant la lipofection par modification des caracteristiques physico-chimiques du lipoplexe. Le deuxieme volet de ce travail concerne le ciblage extracellulaire, envisage dans le systeme modele du recepteur aux asialoglycoproteines des hepatocytes. Des liposomes cationiques a tetes de ciblage galactosylees ont permis de definir les caracteristiques structurales et physico-chimiques les plus favorables pour l'accessibilite de la tete de ciblage. L'integration d'un espaceur polyethyleneglycol au lipide galactosyle a permis de limiter l'internalisation non specifique des lipoplexes dans les cellules non visees, nous n'avons pas observe de ciblage des hepatocytes.