Abstract FR:

Les nucleoside diphosphate kinases sont les enzymes responsables in vivo de la synthese des nucleosides triphosphates a partir de l'atp. Elles sont impliquees dans des fonctions cellulaires normales et pathologiques, eventuellement independamment de leur activite enzymatique mais les mecanismes mis en jeu sont actuellement mal definis. Chez l'homme, six isoformes sont decrites a ce jour : nm23-h1, nm23-h2, dr-nm23, nm23-h4, nm23-h5 et nm23-h6. Mon travail a consiste en l'etude de nm23-h4, dont l'existence a ete mise en evidence au laboratoire. J'ai clone l'adnc nm23-h4. Le gene est localise sur le chromosome 16p13. 3. L'expression de l'arnm nm23-h4 est variable selon les tissus et particulierement abondante dans la prostate et le foie. La proteine nm23-h4 (187 acides amines ; mr : 20650) se distingue des autres isoformes humaines, par la presence d'une extension n-terminale caracteristique d'un adressage mitochondrial. La proteine entiere et une forme tronquee sans l'extension ont ete exprimees chez e. Coli et purifiees. La forme tronquee possede l'activite ndp kinase tandis que la forme entiere est inactive, suggerant un effet inhibiteur de l'extremite n-terminale. L'analyse de la structure tridimensionnelle par diffraction aux rayons x, montre que nm23-h4 est hexamerique comme les autres ndp kinases eucaryotes. Nm23-h4 possede un residu serine en position 129 correspondant a la mutation conditionnelle letale dominante de la ndp kinase de la drosophile. Le mutant s129p, beaucoup plus stable aux agents denaturants, confirme l'importance de ce residu dans la stabilite de la proteine. Nous montrons par transfert de western et analyse confocale de cellules humaines sur-exprimant la proteine fusionnee a la gfp, que nm23-h4 est une ndp kinase mitochondriale, la premiere caracterisee chez les mammiferes. Son import dans l'organite s'accompagne d'un clivage proteolytique, vraisemblablement de l'extension n-terminale. Nm23-h4 semble etre associee aux sites de contact mitochondriaux entre les membranes interne et externe. Le role de nm23-h4 dans la mitochondrie est discutee dans le contexte des etudes anterieures sur l'activite ndp kinase mitochondriale et de son association aux sites de contact.