Abstract FR:

L'objectif de cette etude etait de modifier les proprietes de liaison d'un anticorps monoclonal anti-estradiol pour tenter d'ameliorer la sensibilite d'un test de diagnostic. Cet anticorps, appele 10g6d6, a ete obtenu par immunisation de souris avec de l'estradiol couple chimiquement a la bsa. L'ingenierie genetique et moleculaire de l'anticorps 10g6d6 a ete initiee dans le but d'ameliorer son affinite pour l'estradiol naturel au detriment de l'estradiol couple chimiquement. Ce travail s'est deroule en deux etapes. Dans un premier temps, nous avons cherche a identifier les acides amines du paratope de l'anticorps impliques dans la reconnaissance de l'estradiol et plus particulierement ceux proches du bras chimique. Pour cela, un modele moleculaire des domaines variables de l'anticorps a ete construit et les acides amines exposes au solvant a l'interface vh/vl ont ete soumis a une analyse mutationnelle. Ces resultats, combines avec l'analyse de reactions croisees de l'anticorps vis-a-vis de derives de l'estradiol, nous ont permis de proposer un modele moleculaire du complexe anticorps/estradiol. Cette etude a ete confirmee et completee par des donnees cristallographiques. Les resultats obtenus par modelisation/analyse mutationnelle et cristallographie nous donc ont permis d'acquerir une bonne connaissance du complexe anticorps/estradiol branche et d'identifier deux acides amines proches du bras chimique. Dans un deuxieme temps, deux banques de mutants de l'anticorps autour de ces deux positions cles ont donc ete construites dans un systeme permettant l'expression a la surface du bacteriophage m13. Ces deux banques ont ete criblees vis-a-vis de l'estradiol naturel permettant d'isoler des sequences originales. Les nouvelles molecules de la premiere banque (dans le cdr h3 ou la leucine 98 et 3 positions contigues sont mutees) ont ete testees pour determiner leurs proprietes de liaison pour l'estradiol naturel et l'estradiol branche par rapport a l'anticorps de depart.