Caractérisation fonctionnelle des cyclophilines de Leishmania dans la différenciation et l'infection parasitaire
Institution:
Paris 7Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Leishmania infection involves parasite differentiation from insect-stage promastigotes to pathogenic amastigotes inside phagocytes of vertebrate hosts. Recent phosphoproteome studies of Leishmania in culture have suggested a role of cyclophilins (CyPs) in parasite differentiation. The objective of this thesis is to investigate the role of CyPs in the biology of Leishmania differentiation and virulence. BLAST analysis identified 17 CyP-like proteins in the L. Major genome. CyP-specifïc inhibitor cyclosporin A strongly reduced the viability of L. Donovani promastigotes under heat shock and axenic amastigotes suggesting that parasite thermotolerance was dramatically altered in presence of this drug. CsA-affinity chromatography revealed L. Donovani cyclophilin 40 (LdCyP40) as a major CsA-binding protein. Parasite mutants lacking the CYP40 gene were generated using a targeted deletion approach. The cyp40-/- promastigotes were viable and competent to differentiate into axenic amastigotes, but were defective in the development of metacyclic-like promastigotes and failed to establish stable infection in macrophages in vitro. The present study uncovered important roles of Leishmania CyPs in parasite thermotolerance and of CyP40 in parasite intracellular adaptation and survival.
Abstract FR:
L'infection par Leishmania nécessite la différenciation des parasites du stade promastigote, présent chez l'insecte, au stade amastigote qui se développe dans les cellules phagocytaires de l'hôte vertébré. De récentes études phosphoprotéomiques effectuées sur des Leishmania en culture ont suggéré l'implication des cyclophilines (CyPs) dans la différenciation du parasite. L'objectif de cette thèse est d'étudier le rôle des CyPs dans la biologie de la différenciation et la virulence de Leishmania. L'analyse BLAST a permis d'identifier 17 protéines de type CyP dans le génome de L. Major. La cyclosporine A, inhibiteur spécifique de CyP, réduit fortement la viabilité des promastigotes ayant subi un choc thermique ainsi que des amastigotes axéniques de L. Donovani suggérant un rôle important des CyPs dans la thermotolérance parasitaire, une fonction essentielle pour le développement et la survie intracellulaire des amastigotes. Une approche par chromatographie d'affinité utilisant la CsA immobilisée a permis de révéler l'association préférentielle de la CsA avec la cyclophiline 40 de L. Donovani (LdCyP40). Des mutants défectueux pour le gène CYP40 ont été générés par recombinaison homologue. Les promastigotes cyp40-/- sont viables et capables de se différencier en amastigotes axéniques mais sont incapables de se différencier en promastigotes métacycliques et d'établir une infection dans les macrophages in vitro. La présente étude révèle les rôles importants des CyPs de Leishmania dans la thermotolérance parasitaire et de CyP40 dans l'adaptation et la survie intracellulaire du parasite.