Abstract FR:

Nous nous sommes interesses aux proteines membranaires, sec61 et pmp1. Sec61 (9kda) est essentielle au fonctionnement du complexe de translocation des proteines a travers la membrane du reticulum endoplasmique chez les mammiferes et pmp1 (4 kda) regule l'activite de l'atpase a h + de la membrane plasmique de la levure. D'apres les predictions structurales, sec61 et pmp1 possedent une helice transmembranaire et un domaine cytoplasmique basique. Pour comprendre les relations sequence-structure et structure-fonction de ces systemes, l'etude conformationnelle par rmn- 1h des proteines sec61 et pmp1 apparait appropriee. La purification de ces proteines etant tres difficile, nous avons, dans un premier temps, etudie des fragments synthetiques incluant les domaines cytoplasmiques plus un ou deux tours d'helice transmembranaire. Nous avons entrepris leur etude structurale en presence de micelles de dpc, mimant une interface membranaire. Le fragment de sec61 forme un complexe stable avec la micelle et acquiert une structure helice -boucle-helice tres bien definie avec une helice amphipatique couchee a la surface de la micelle. La boucle (4 residus) est flanquee par deux structures de verrouillage, tres conservees chez toutes les proteines homologues. Le fragment de pmp1 forme une seule helice et l'ajout de dpc ou de lipides protones ont permis de mettre en evidence des interactions specifiques entre les protons du lipide et ceux de pmp1. Des experiences de rmn- 2h en bicouches phospholipidiques ont revelees que pmp1 interagit specifiquement avec les lipides anioniques. Ces deux etudes nous ont permis de proposer un modele structural pour sec61 et pmp1 inseres dans une bicouche et de mettre en evidence deux types de conformations permettant l'exposition de nombreuses charges positives a l'interface.