Abstract FR:

L'anion superoxyde (o 2 ) et le monoxyde d'azote (no) sont deux radicaux impliques dans la signalisation cellulaire. Ils interviennent en particulier dans la regulation physiologique des fonctions cardio-vasculaires mais aussi dans le developpement de pathologies telles que l'atherosclerose, l'hypertension arterielle, l'ischemie, la thrombose, et les phenomenes inflammatoires. La comprehension des mecanismes dans lesquels ces composes sont impliques necessite des methodes de dosage tres sensibles et realisables in situ compte tenu de leur tres grande vitesse de diffusion et de leur reactivite. Les objectifs de cette etude ont ete de mettre au point une methode electrochimique direct de quantification de o 2 et d'etudier les interactions existant entre no et o 2 : d'abord dans des solutions salines simples puis dans differents types de systemes cellulaires. Pour cela, l'oxydation de o 2 a ete detectee par amperometrie differentielle a double impulsion d'amplitude constante (dnpa) a une ultramicroelectrode (ume) de carbone a 0,1 v/ecs. Cette methode sensible (limite de detection d'environ 10 nm) et suffisamment specifique nous a permis de detecter la synthese enzymatique de o 2 par le systeme xanthine/xanthine oxydase. Nous avons pu aussi etudier des productions de o 2 sur des cellules endotheliales et musculaires lisses humaines, en culture, soumises a un stimulus inflammatoire. L'etude des interactions no/o 2 a ete effectuee en mesurant la production de no sur des cellules endotheliales stimulees par des agonistes tels que la thrombine ou l'histamine. La liberation de no a ete quantifiee par dnpa a 0,75 v/ecs a l'aide d'une ume de carbone recouverte d'un film electropolymerise de porphyrine de nickel et d'un film de nafion. Cette etude nous a permis de demontrer : 1) une participation de o 2 a la degradation du no endothelial, 2) un role des elements traces comme fe 2 + dans l'activation de la no-synthetase (nos) endotheliale, et 3) l'existence pour la nos d'etats d'activite distincts regules par l'apport en substrat et par les ions calcium extracellulaires et les metaux de transition. Ce travail a permis de demontrer que les techniques electrochimiques de dosage de o 2 et de no, seules techniques mesurant en temps reel la liberation locale de ces deux radicaux sans perturber le metabolisme cellulaire, constituent des outils pour aborder au niveau des cellules vasculaires, les mecanismes regulant leurs production physiologiques et leurs alterations pathologiques.