Abstract FR:

Plusieurs etudes chez les primates, les souris et l'homme ont montre l'importance de la presence d'un gene nef fonctionnel, in vivo, pour une replication virale efficace et pour le developpement du sida. In vitro, l'activite de nef la plus documentee est sa capacite a induire une diminution de l'expression a la surface cellulaire des molecules cd4 et du chm-i. Cette activite resulte a la fois d'une acceleration de l'endocytose a partir de la surface cellulaire et d'une retention de ces proteines membranaires au niveau d'un compartiment golgien tardif (tgn). L'objectif de cette these etait d'identifier et de caracteriser fonctionnellement les interactions de nef avec la machinerie d'endocytose des proteines. Nous avons montre en utilisant la technique du double hybride que la proteine nef du vih-1, comme celles de vih-2 et vismac, sont capables d'interagir specifiquement avec la chaine moyenne 1 des complexes d'adaptine ap-1. De plus, via cette interaction, la proteine nef vih-1 recombinante peut recruter l'ensemble des autres constituants des complexes ap-1. Une cartographie fine de la region d'interaction nef-1 en double hybride, a permis de definir precisement deux regions, une, des aa 140 et 150 et l'autre des aa 180 et 189. Bien que la region en amont semble jouer un role predominant, il faut muter simultanement les deux regions de nef pour abolir l'interaction nef-1. Les analyses d'immunofluorescence ont montre une correlation etroite entre la perte d'interaction nef-1 et la perte d'adressage d'une proteine chimerique cd8-nef vers la voie d'endocytose (effet en cis). De plus, des experiences de cytometrie de flux ont montre que les mutants des deux regions de nef ont egalement perdu leur effet en trans de moduler l'expression