Abstract FR:

Ce travail de these avait pour but de developper une application originale d'un nouveau procede de dosage immunometrique de molecules mis au point au laboratoire (en particulier d'haptenes de bas poids moleculaire). Ce procede appele spie-ia (solid phase immobilized epitope-immunoassay) utilise un seul anticoprs et une etape necessitant le couplage covalent de la molecule sur l'anticorps de capture immobilise. En utilisant comme modele le 17-estradiol, une molecule dont la structure chimique ne permettait pas d'utiliser les reactifs chimiques initialement decrits dans le procede, nous avons dans un premier temps demontre qu'une irradiation uv permettait de coupler l'estradiol sur l'anticorps et ainsi de realiser le dosage spie-ia de cette molecule. Nous avons par la suite demontre pour la premiere fois que des reactions de chimie radicalaire engendraient tres simplement et efficacement cette etape d'immobilisation covalente. Cette chimie consiste a produire in situ des radicaux libres hydroxyles (oh )̱ par des reactions de type fenton (sels de metal + h 2o 2). Nous avons etudie en detail les parametres lies a la nature du metal, sa concentration et celle de l'oxydant ainsi que l'effet de la nature du milieu reactionnel. Ce dosage applique a des echantillons de serum humain est sensible (limite de detection de 5 pg/ml), specifique (aucune reaction croisee avec les autres steroides naturels), precis et fiable (coefficients de variation intra- et inter-essai inferieurs a 7% et 15% respectivement). Une tres bonne correlation est observee avec un dosage commercial ria de type competitif. Nous avons aussi montre que cette nouvelle technologie pouvait etre transpose a l'automate d'immunoanalyse vidas de biomerieux. L'ensemble