Abstract FR:

Des protocoles rapides et efficaces pour la creation de regenerants ont ete developpes a partir d'hypocotyles d'e. Globulus. La competence a la dedifferenciation dans ces explants a ete detectee pendant une courte periode, au niveau des cellules en cours de division pour la mise en place des glandes secretrices. L'utilisation de la souche 82. 139 d'agrobacterium tumefaciens s'est aussi averee efficace pour regenerer des bourgeons a partir de tumeurs induites sur des vitro-plants clones. La capacite caulogene des tumeurs est correlee a un taux eleve de zeatine et de zeatine riboside endogenes compare a celui des tumeurs non caulogenes induites par la souche c58. Par ailleurs, il a ete demontre, au moyen d'une souche derivee de 82. 139 comportant le gene rapporteur gus, que les bourgeons issus des tumeurs sont non transformes. Les contenus en adn nucleaire sont remarquablement stables au cours de la differenciation et de la dedifferenciation chez e. Globulus et tous les regenerants obtenus par les deux methodes de regeneration sont diploides. Apres avoir participe a la mise au point d'un protocole d'immunolocalisation des cytokinines bases sur le modele tabac, nous avons applique ce protocole a l'e. Globulus et montre que le stade de competence des hypocotyles a la regeneration est correle a un fort equipement en cytokinines endogenes des glandes a huile en cours de formation. Grace a une approche de double marquage in situ des cytokinines et des sites d'expression du gene gus, nous avons aussi montre que les sites endogenes fortement charges en cytokinines dans les tumeurs caulogenes correspondent aux sites d'expression du t-dna de la souche 82. 139, les regenerants issus des regions superficielles etant non transformes et beaucoup moins riches en cytokinines. De facon annexe, il a aussi ete observe que les cytokinines s'accumulent particulierement au tout debut de la differenciation des tracheides dans les tumeurs. Diverses approches de transformation genetique d'e. Globulus par vecteurs derives d'agrobacterium et par biolistique ont enfin ete developpees, permettant de definir des conditions efficaces pour la transformation et les causes de la difficulte d'obtention de regenerants transgeniques.