Abstract FR:

Le gene slsi code une proteine du reticulum endoplasmique impliquee dans la translocation co-traductionnelle chez la levure yarrowia lipolytica (boisrame et al. , 1996). Afin d'en etudier le role, plusieurs approches ont ete entreprises. Une mutagenese dirigee a permis d'obtenir un mutant (sls1. 5) specifiquement affecte dans la translocation d'une proteine rapporteuse. Par ailleurs, nous avons montre que sls1p et la proteine chaperon kar2p peuvent etre co-purifiees avec le translocon co-traductionnel. Des experiences de co-immunoprecipitation et de double-hybride ont montre une interaction entre sls1p et kar2p. La proteine sls1. 5p s'est revelee incapable d'interagir avec kar2p, suggerant que l'interaction entre les deux proteines est requise pour une translocation efficace (boisrame et al. , 1998). Nous avons construit une banque genomique de yarrowia lipolytica dans un systeme double-hybride, et nous l'avons criblee en utilisant sls1p comme appat. Ce travail a permis de montrer que sls1p interagit avec le domaine atpase de kar2p, suggerant qu'il s'agit d'un nouveau co-facteur d'hsp70s (kabani et al. , 2000). Une mutation de kar2p (g234r) restaurant l'interaction avec sls1. 5p a suggere que l'interaction entre les deux proteines est atp et/ou conformation dependante. Afin de verifier cette hypothese, nous avons entrepris la caracterisation de l'homologue de sls1p chez saccharomyces cerevisiae (yol031c). Des interactions genetiques entre le mutant scsls1 et plusieurs alleles kar2 ont montre un role de scsls1p dans la translocation, mais aussi dans l'erad. Des experiences de double-hybride et de liaison in vitro utilisant des mutants de fixation d'atp et/ou de conformation de kar2p ont montre que scsls1p interagit preferentiellement avec la forme liee a l'adp de kar2p. Nous avons egalement montre que scsls1p stimule l'echange adp pour atp apres activation par sec63p de kar2p, permettant probablement un turn-over plus rapide de kar2p a la membrane (kabani et al. , 2000).