thesis

Biochimie subcellulaire de l'épithélium vésical de crapaud : application à l'étude du transport transépithélial d'eau et de sa régulation par l'hormone antidiurétique

Defense date:

Jan. 1, 1990

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Institution:

Paris 12

Disciplines:

Abstract EN:

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Abstract FR:

L'hormone antidiuretique (adh) provoque l'insertion d'agregats de particules dans la membrane plasmique (mp) apicale des cellules epitheliales de la vessie d'amphibiens. Au repos, ces agregats sont presents dans la membrane de vesicules appelees agrephores. Une etude analytique du fractionnement subcellulaire par centrifugation differentielle et isopycnique a ete entreprise. La selection des marqueurs enzymatiques et la caracterisation des compartiments subcellulaires ont ete effectuees grace a la centrifugation isopycnique des granules cytoplasmiques, combinee ou non a l'emploi d'agents perturbant la densite d'equilibre de mp (digitonine) ou de re (ppi). Les marqueurs associes a mp ont une densite d'equilibre inferieure a 1,16 et sont alourdis par la digitonine. Pour reperer les agrephores, nous les avons charges de peroxydase de raifort. Apres centrifugation isopycnique, le profil de distribution de cet enzyme differe de ceux obtenus pour mp ou pour les mitochondries, mais se superpose a celui des lysosomes. Nous avons isole une preparation riche en gamma-glutamyltranspeptidase, enzyme d'origine probablement apicale. L'examen au microscope electronique et la sensibilite a la digitonine confirment la richesse en mp. La composition polypeptidique de cette preparation est tres differente de celle d'un homogenat cellulaire, mais aucune difference entre le materiel controle ou traite par l'adh n'a pu etre decelee par electrophorese. Divers reactifs chimiques, capables de reagir a la surface des cellules, ont permis de preciser la nature apicale de certains polypeptides de mp