Construction de vecteurs du gène du lysozyme, étude d'un système modèle et expression dans des plantes transgéniques
Institution:
Bordeaux 2Disciplines:
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Les agents responsables de certaines maladies de plantes, notamment ceux associes a la maladie du greening des agrumes, sont sensibles au lysozyme. Nous avons decide d'introduire dans des plantes le gene codant pour le lysozyme de blanc d'uf de poulet afin de pourvoir a une defense accrue contre ces pathogenes. Nous avons envisage d'utilise la pervenche (catharantus roseus) comme modele: celle-ci est en effet une bonne plante indicatrice de nombreuses maladies affectant les citrus. Ainsi nous avons propose un protocole d'obtention et de culture de protoplastes adapte a du materiel issu de serre ou clone in vitro. Cependant, nous n'obtenons pas de regeneration en plantes entieres et l'efficacite d'etalement est mediocre. A l'oppose l'utilisation d'a. Rhizogenes semble relativement efficace puisqu'il nous a ete permis d'obtenir des plantes entieres transformees. Nous avons construit 3 vecteurs susceptibles d'exprimer le gene du lysozyme dans les plantes: un vecteur possedant la sequence complete du lysozyme avec le prelysozyme (p90) et deux vecteurs legerement modifies a leur extremite 5, sans prelysozyme (p2p/p2n). Ces plasmides ont ete testes sur le tabac, materiel a croissance rapide et particulierement maleable. Des experiences d'expression transitoire dans des protoplastes de tabac ont confirme l'aptitude de p90 et p2n a produire du lysozyme actif dans un systeme vegetal. Nous avons aussi transfere les vecteurs dans deux souches d'a. Rhizogenes (a4rs et 15834) et mene des infections sur des feuilles de tabac. Les plantes regenerees a partir des hairy-roots obtenues ont ete analysees: elles sont en general genetiquement modifiees. Chez certaines plantes on note une activite lysozyme/ la presence de la molecule dans les plantes a ete confirmee par un test elisa au moyen d'un anticorps specifique