Abstract FR:

La compréhension de l'implication de la glycosylation dans les fonctions biologiques des glycoconjugues est une question fondamentale, en particulier pour l'usage thérapeutique des glycoprotéines recombinantes. L'analyse structurale des glycannes issus de glycoconjugues est une tâche complexe requérant la détermination de nombreuses caractéristiques, telles que la masse moléculaire, la composition, la séquence et les points de branchement des monosaccharides, les liaisons glycosidiques et la configuration des carbones anomeriques. Aucune des méthodologies actuellement utilisables ne permet d'obtenir ces données en une seule étape, qui plus est dans le cas d'échantillons disponibles en microquantités. Le présent travail s'inscrit dans ce contexte et une méthodologie permettant la détermination des caractéristiques structurales des glycannes a été développée. Trois approches distinctes ont été mises au point, basées sur la spectrométrie de masse, en particulier en mode tandem et les techniques récentes d'ionisation douce. Elles conjuguent le potentiel des techniques de spectrométrie de masse avec des méthodologies de dégradation chimique et enzymatique. L'analyse des oligosaccharides permethyles par spectrométrie de masse en tandem en mode electrospray livre des informations pertinentes permettant la détermination de la séquence glycosidique et l'identification des points de branchement. Un procédé a été développé pour la dégradation des oligosaccharides permethyles et les dérives mono saccharidiques ainsi obtenus sont analyses par spectrométrie de masse en tandem couplée à la chromatographie en phase gazeuse. Les fragmentations spécifiques observées caractérisent les différents types de liaison glycosidique. En dernier lieu, la configuration des carbones anomiques est établie grâce à l'analyse par spectrométrie de masse à désorption laser des produits de digestions séquentielles par des exoglycosidases. Ces approches ont été combinées et appliquées avec succès a la caractérisation de glycannes et peuvent être intégrées dans une stratégie globale d'analyse structurale de la composante glycannique de glycoconjugues.