Reversion tumorale : étude fonctionnelle de TSAP6 et TCTP
Institution:
Paris 7Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
My work consisted in a functional study of two genes TSAP6 and TCTP regulated during the process of the tumoral reversion in knockout mice in order to understand their roles during the reversion process. TSAP6-deficient mice display a microcytic anemia due to a defect of the turn-over of Transferrin-Receptor by exosomes in reticulocytes. In these animals, the response to stimulation of apoptosis is also compromised and accompanied by a defect of exosome secretion. The deletion of the lpt1 gene in knockout mice is lethal. The loss of TCTP causes an increase of apoptosis during embryogenesis leading to the death of the embryo between the 6,5 and 9,5th day of the development. The crystal structure of human TCTP revealed a homology between helices H2 and H3 of TCTP and helices H5 and H6 of BAX a proapoptotic protein involved in mitochondrial membrane permeability. We demonstrated that these two helices are responsible for the antiapoptotic function of TCTP and inhibit the dimerization of BAX in the mitochondrial membrane preventing cell death. We also show that Sertraline and Thioridazine which kill cancer cells and decrease TCTP in cells, bind to TCTP and prevent the formation of the TSAP6-TCTP complex. They increase the TSAP6 level and activate TCTP secretion by a pathway independent of exosomes. These results shed light on the function of these two proteins during the process of tumoral reversion
Abstract FR:
Mon travail de doctorat a consisté en l'étude de deux gènes, TSAP6 et TCTP, qui sont régulés de manière différentielle dans la réversion tumorale. Les protéines encodées par ces deux gènes interagissent et forment un complexe tant in vitro que in vivo. Mon objectif était de mieux comprendre la fonction biologique de ces deux gènes. Différentes approches ont été employées, notamment la cristallographie (TCTP), souris knockout (TSAP6 et TCTP) et études par mutagénèse dirigée (TSAP6 et TCTP). Les souris knockout pour le gène tsapô présentent une anémie microcytaire. Nous démontrons que cette anémie est due à un retard de maturation des réticulocytes ainsi qu'à une sécrétion défectueuse du récepteur à la Transferrine par les exosomes. Étant donné que le gène TSAP6 est une cible transcriptionnelle directe de la p53, nous avons voulu analyser la sécrétion des exosomes suite à une stimulation de p53 (par rayon X ou Actinomicine D). Nous montrons qu'en l'absence de TSAP6, on ne parvient pas à stimuler une sécrétion des exosomes. De manière plus générale ces expériences ont démontré que le gène TSAP6 avait in vivo un rôle prédominant dans la sécrétion des exosomes, y compris suite à l'activation de la p53. Nous avons surtout étudié le rôle que joue TCTP dans l'apoptose. La délétion du gène tctp dans les souris knockout est létale en provoquant une augmentation de l'apoptose au cours de l'embryogenèse. Cette mort embryonnaire se produit entre les 6,5ème et 9,5eme jours du développement. La détermination de la structure de la protéine TCTP par cristallographie avec une résolution de 2A montre que la protéine humaine est très homologue à celle de s. Pombe. De plus, nous avons observé suite à une analyse informatique une homologie de structure entre les hélices H2 et H3 de TCTP et les hélices H5 et H6 de BAX, une protéine pro-apoptotique impliquée dans la perméabilité de la membrane mitochondriale. On a démontré que grâce à ces deux hélices, TCTP effectue son action anti-apoptotique et inhibe la dimérisation de BAX à la membrane des mitochondries, empêchant ainsi l'apoptose. Nous montrons également que la Sertraline et la Thioridazine, qui induisent la mort des cellules tumorales et une baisse concomitante de TCTP, se lient directement à TCTP et empêchent ainsi la formation du complexe TSAP6-TCTP.