Abstract FR:

Les reponses precoces a la stimulation de recepteurs couples a des activites enzymatiques generant une synthese de second messager, peuvent etre etudiees utilisant des preparations membranaires grace a un appareil de melange rapide, pulsed quenched flow. Cette technologie a ete appliquee aux reponses beta-adrenergiques de membranes plasmiques de cellules de gliome de rat, de la lignee c6, a l'echelle de la seconde: production d'amp cyclique et phosphorylation de proteines membranaires. La production d'ampc a ete suivie par un dosage de haute sensibilite de l'activite adenylyl cyclase mettant en uvre un ria. Elle est caracterisee par: 1) un jet d'amp cyclique en presence soit d'un agoniste beta-adrenergique, soit de forskoline sur une a deux secondes avant l'etablissement d'un etat stationnaire plus lent; 2) l'inhibition de ce jet par l'adp. La quantite d'amp cyclique produite demontre que l'interaction entre recepteurs couples positivement (recepteurs beta-adrenergiques) et negativement (recepteurs purinergiques de l'adp) se traduit au niveau de la membrane par un changement de fraction d'adenylyl cyclase active. Le temps de reponse suggere que l'action des proteines g#s et g#i a lieu sur un temps inferieur a la demi-seconde, l'amplitude du jet changeant sans que son decours ne change. Lors de la stimulation du recepteur beta-adrenergique, cette production tres rapide d'amp cyclique est suffisante pour activer significativement la proteine kinase ampc-dependante. En presence d'atp-gamma-#3#2p, en cinq a sept secondes le marquage d'un nombre tres limite de proteines est stimule specifiquement par l'isoproterenol, (86-88 kda, 59-60 kda, 44-45 kda), alors qu'un grand nombre de proteines sont phosphorylees identiquement en absence et en presence de l'agoniste. Notre approche, sans permettre de definir les constantes de temps des interactions entre les diverses proteines g impliquee