Etude la recombinaison au cours de la réplication du locus mat 1 de S. Pombe
Institution:
Paris 7Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
I have shown that repair of a single and unique broken replication fork is performed by a homologous recombination (HR) mechanism. The manner in which recombination intermediates are resolved depends on the homologous template used for repair. In a wild-type strain, the silent ectopic sequences are used as donors for the MT switching process. In this case, the recombination intermediate is resolved by the XPF-like nuclease complex, Swi9-Swi10 in S. Pombe. In absence of the donor sequences, the HR-dependant pathway utilizes the sister chromatid as an alternative template for repair. We have shown that the Eme1-Mus81 complex is essential to resolve recombination between sister chromatids. The 5'-3' Pfh1 helicase appears to play a role during the MT switching recombination process. A genetic screen (A. Holmes) allowed us to identify Lsd1 (Lysine specific demethylase) as a new factor required for imprint formation. It was shown that the high-mobility group (HMG) domain is necessary for imprinting at man. At the same time, I have shown that Lsd1 is essential for the replication fork pause activity of MPS1 at man, as well as at R7"S1 and at the replication fork barrier at rDNA loci. Since these three known replication fork arrest sites in S. Pombe, also depend on Swi1-Swi3 function, the epistatic relationship between Lsd1 and Swi1 at man was analysed by chromatin immunoprecipitation (A. H. ). Lsd1 activity is required for Swi1 interaction with mat1; conversely, Swi1 activity is not required for Lsd1 interaction with man. These results indicate a new function for Lsd1 in replication and imprint formation, independent of its histone demethylase activity.
Abstract FR:
J'ai montré que la réparation d'une seule et unique fourche de réplication cassée est un mécanisme dépendant de la Recombinaison Homologue (RH). Le devenir de l'intermédiaire de recombinaison dépend de la séquence homologue utilisée. Chez une cellule sauvage, l'utilisation d'une séquence homologue ectopique aboutit au changement de type sexuel. Dans ce cas, l'intermédiaire de recombinaison est résolu par l'action du complexe à activité nucléase Swi9-Swi10. Par contre, en absence de ces séquences ectopiques, le rôle essentiel de la RH indique que la chromatide soeur est utilisée. Nous avons montré que le complexe Eme1-Mus81 est indispensable à la résolution des intermédiaires de recombinaison entre chromatides soeur. De plus, nous résultats montre que l'hélicase Pfh1 pourrait avoir un rôle dans la résolution de l'intermédiaire de RH, lors du changement de type sexuel. Un crible génétique a permis d'identifier le gène /sd1 (lysine spécifie déméthylase), comme un nouveau facteur impliqué dans la formation de l'empreinte. Allyson Holmes a ainsi pu montrer que le domaine HMG de Lsd1 est essentiel à la formation de l'empreinte. En parallèle, j'ai montré que Lsd1 est nécessaire aux arrêts de fourche de réplication à man, aux sites MPS1 et RTS1, et à l'ADNr. Ces trois sites de pause étant dépendants de la fonction de Swi1-Swi3, Allyson a analysé le lien épistatique entre Lsd1 et le complexe Swi1 au locus mat1. Alors que l'activité de Lsd1 est nécessaire à l'interaction de Swi1 avec man, l'activité de Swi1 ne l'est pas pour l'interaction de Lsd1 avec man. Ces résultats montrent une nouvelle fonction de Lsd1, indépendamment de son activité d'histone déméthylase.