Abstract FR:

Pour nous permettre de realiser une etude systematique des proprietes organoleptiques et biologiques des peptides (en majorite des decapeptides), nous avons construit une banque de souches transformees de saccharomyces cerevisiae. Chaque clone de cette banque possede un vecteur qui code pour un peptide unique de sequence inconnue et qui permet son excretion dans le milieu de culture. La secretion est obtenue en fusionnant le gene codant pour le peptide avec celui codant pour le pre-pro du facteur. La premiere partie de ce memoire decrit les differentes etapes de la construction du vecteur d'expression-secretion et de la souche de levure receptrice. Nous decrivons en particulier le principe original du procede de synthese des genes par amplification enzymatique et montrons comment la synthese chimique d'oligonucleotides a ete orientee de facon a obtenir une majorite de decapeptides et pour que tous les acides amines soient representes de facon equitable dans les peptides. La transformation de la levure avec une population de plasmides codant chacun pour un peptide unique nous permet d'obtenir une banque d'environ 4000 clones. La deuxieme partie de ce memoire presente l'analyse de la banque. Les dosages effectues sur un peptide facilement identifiable dans le milieu permettent de montrer que le systeme d'excretion est fonctionnel. Par contre, les dosages hplc revelent que la quantite de peptides produits est faible car inferieure a 10 m. Ce resultat nous a amene a developper plusieurs strategies pour tenter d'augmenter la secretion. Nous avons tout d'abord construit un plasmide se maintenant en un plus grande nombre de copies dans la cellule et aussi realise des cultures a haute densite cellulaire. On arrive ainsi a augmenter la production de peptides qui est d'environ 10##7 m. La faible production de ces transformants serait due a une degradation par la souche receptrice. On pense que cette degradation n'est pas due a une protease extracellulaire