Mise au point d'un système dérivé du transposon Mos1 comme vecteur non viral de transfert de gène en cellules eucaryotes
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Abstract EN:
The mariner Mos 1 transposon can naturally move into the genome. The first research axis of this work concern the transposon characteristics which act upon the transposition activity of Mos1 (like the nucleic content of the transposon and its size). It have shown that a size of transgene upper than 2,5 kb limit the transposition efficiency, that a strong GC percentage favour the transposition, and that there is no minimal size for Mos1 transposition. The second research axis concern the adaptation and improvement of the Mos1 system to the eukaryotic cells, to developp a nonviral vector for gene transfer. The addition of a nuclear localization sequence improve the nuclear transfer, the "humanization" of the transposase sequence increase it expression in mammal cells, and the use of the HSVtK suicide system permit to limit the recombination events.
Abstract FR:
Le transposon Mariner Mos 1 a la capacité intrinsèque de changer de position dans le génome. Le premier axe de mes travaux de thèse est consacré aux caractéristiques du transposon influençant l'activité de transposition de l'élément Mos1 (dont la composition nucléique du transposon et sa taille). Il a permis de montrer qu'un de transgène de taille supérieure à 2,5kb limite l'efficacité de transposition, qu'un fort pourcentage en GC favorise la transposition, et qu'il n'existe pas de taille minimale pour la transposition de Mos1. Le deuxième axe de recherche porte sur l'adaptation et l'amélioration du système Mos1 au contexte des cellules eucaryotes, pour développer un vecteur intégratif non viral de transfert de gène. L'ajout d'une séquence de localisation nucléaire améliore le transfert du noyau, l'humanisation de la séquence de la transposase augmente son expression en cellules de mammifères, et l'utilisation d'un système suicide HSVVtK permet de limiter les évènements de recombinaison.