thesis

Caractérisation et immunogénicité de l'antigène capsulaire polysaccharidique de Streptococcus pneumoniae de type 5 dans un vaccin conjugué

Defense date:

Jan. 1, 2003

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Institution:

Nice

Disciplines:

Biology

Authors:

Directors:

Abstract EN:

Conjugate vaccines are developed to project infants against pneumococcal infections. These vaccines are composed of polysaccharides from different serotypes coupled to carrier proteins. We focused on pneumococcal type 5 polysaccharide (PSPn5) conjugated to tetanus toxoid by reductive amination. Structural analysis (RMN, HPAEC-PAD) showed a modification of PSPn5 that occurred during amination. These modification was identified as the reduction of the 2-acétamido-2,6-désoxyhexo-4ulose (Sug) (one of the five monosaccharides constituting the repeating unit of PSPn5) in β-D-fucosamine and the modification of Sug in a X compound. Structural analysis of aminated PSPn5 didn’t permit to elucidate X compound structure. Reductive amination conditions have been optimized to limit structural modifications of PSPn5 in the conjugate. In order to evaluate PSPn5 structural modifications influence on conjugate immunogenicity, three different conjugated were synthesized with : classically aminated PSPn5, PSPn5 aminated under optimized conditions and PSPn5 totally reduced before amination. Immunological study in rabbits demonstrated that the three conjugates are immunogenic and induce functional antibodies, but it has been evidenced that reduced PSPn5 conjugate and optimize aminated PSPn5 conjugate exhibit the same immunogenicity whereas X compound presence alters immunogenicity of classically animated PSPn5 conjugate.

Abstract FR:

Dans le but de vacciner les nourrissons contre les infections à pneumocoque des vaccins conjugués sont développés. Ces vaccins comprennent des polysaccharides de sérotypes différents couplés à des protéines porteuses. Parmi ces sérotypes, nous nous sommes intéressés au polysaccharide pneumococcique de type 5 (PSPn5) conjugué à l’anatoxine tétanique par amination réductrice. Des analyses structurales (RMN, HPAEC-PAD) ont révélé une modification du PSPn5 au cours de son amination. Cette modification a été identifiée comme étant la réduction du 2-acétamido-2,6-désoxyhexo-4ulose (Sug) (un des cinq monosaccharides de l’unité répétitive du PSPn5) en β-D-fucosamine et la modification du Sug en un composé X. La caractérisation structurale du PSPn5 aminé par RMN n’a pas permis d’établir la structure du composé X. Pour limiter les modifications structurales du PSPn5 dans le conjugué, les conditions d’amination réductrice ont été optimisées. Pour évaluer l’impact des modifications structurales du PSPn5 sur l’immunogénicité du conjugué, trois types de conjugués ont été synthétisés : le PSPn5 a été aminé de façon classique, dans les conditions optimisées ou encore aminé après avoir été totalement réduit. Les tests d’immunogénicité chez le lapin révèlent qu’un PSPn5 réduit est aussi immunogène qu’un PSPn5 aminé optimisé. En revanche, la présence de composé X altère l’immunogénicité du PSPn5 aminé classique.