Abstract FR:

Les rétrovirus ont été les premiers virus utilisés comme vecteurs en thérapie génique. La conservation de séquences d'origine virale dans les vecteurs est à l'origine de recombinaisons pouvant conduire à l'obtention de virus partiellement réplicatifs. D'autres évènements de recombinaison ont également été mis en évidence lors de la transcription inverse des ARN viraux. Nombre d'études ont montré que la transcriptase inverse pouvait réaliser des sauts intra- ou inter-moléculaires entre 2 ARNs génomiques. Le premier objectif de notre étude a été d'analyser et de quantifier les évènements de sauts inter-moléculaires réalisés par la transcriptase inverse lors de la synthèse de l'ADN proviral. Pour cela, nous avons construit une série de vecteurs rétroviraux défectifs pour leur réplication, ne pouvant réaliser une réaction complète de transcription inverse. Différentes séquences identiques ont été clonées dans les vecteurs complémentaires afin de comparer les fréquences de recombinaison induites par chacune d'entre elles. Nous nous sommes également intéressés au signal d'encapsidation des vecteurs rétroviraux. Nous avons remplacé, au sein d'un provirus recombinant, le par une banque de séquences aléatoires. Ces vecteurs ont été sélectionnés par une technique dérivée du SELEX. Le crible devait sélectionner, par infection, les séquences capables de se substituer efficacement au sauvage. Enfin, certaines études ont montré que l'expression isolée du gène gag dans un vecteur dérivé du Semliki Forest Virus (SFV) permettait d'obtenir de particules ayant recrutées les ARN hétérologues du vecteur SFV. Nous avons tiré profit de cette observation pour promouvoir le recrutement rétroviral d'un vecteur SFV défectif. Nous avons également montré que les réplicons ARN de SFV pouvaient être mobilisés dans des pseudoparticules formées par la seule expression de l'enveloppe du VSV.