Etude du mécanisme d'activation de la protéine kinase C : Interactions avec les éléments cellulaires
Institution:
Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Protein kinase C comprises a family of serine/threonine kinase, several isozymes each mediating unique intracellular functions. PKC activation in vivo induces conformation changes of the enzyme and its translocation from the cytosol to the membrane. At present, the sequence of the different events included in this activation process is not well characterized. Indeed, this is mainly due to the lack in the available isozyme-selective pharmacological drugs. Using fluorescence imaging, I tried to identify subcellular elements which determine the PKC site-specific activation. Our datas suggested a diacylglycerol mediated regulation of PKC activation process which could be cell type-specific. One of the hypothesis about the function of anchoring proteins is to mediate protein activation process. Actin filaments were identified as specific PKC epsilon anchoring protein in terminal nerves. This suggests that the actin filaments could be both a PKC substrate and a specific anchoring protein. Our datas in living cells suggested that actin filaments were not essential element during the first step of PKC activation process. Furthermore, binding of Receptor for Activated C Kinase RACKs could determine the PKC isozyme specific function in the cell. We used specific isozyme-selective peptides that inhibited or activated PKC activation process to investigate the control of these RACKs on the PKC activation process.
Abstract FR:
La protéine kinase C (PKC) de la famille des Sérine/Thréonine kinases, regroupe plus de douze isoformes et est impliquée dans un grand nombre de processus cellulaires. In vivo, l'activation de la PKC s'accompagne d'un changement de conformation de l'enzyme et de sa translocation du cytosol vers les membranes lipidiques. Actuellement, la séquence des différentes étapes de ce processus demeure mal caractérisée in vivo du fait de la multiplicité des isoformes de la PKC au sein d'une même cellule, du manque d'outils pharmacologiques sélectifs de chaque isoforme et de la difficulté de contrôler les cofacteurs d'activation de la PKC. Le but de mes travaux a été d'identifier par imagerie de fluorescence éléments cellulaires qui déterminent les foyers d'activation de la PKC par imagerie de fluorescence en cellule vivante. Nos résultats suggèrent une régulation du changement de conformation de la PKC alpha par le diacylglycérol, cofacteur activateur, qui dépendrait du type cellulaire. Récemment, les filaments d'actine ont été caractérisés comme protéine d'ancrage pour l'isoforme PKC epsilon au niveau des terminaisons nerveuses, mettant en évidence un rôle important du cytosquelette dans le processus d'activation de la PKC. L'actine, caractérisée jusqu'alors comme un substrat de la PKC, pourrait aussi jouer un rôle sur l'activation de la PKC. Nos données indiquent que les filaments d'actine ne sont pas des éléments essentiels dans les premières étapes du processus d'activation de la PKC. D'autre part, les protéines RACKs, définies comme les récepteurs aux PKC actives, maintiendraient la PKC dans une conformation active. Leur rôle dans le processus d'activation de la PKC demeure actuellement inconnu. Nous avons utilisé des peptides inhibiteur de l'interaction PKC-RACK en cellule vivante afin de mieux caractériser l'importance physiologique de cette interaction dans le processus d'activation de la PKC