Abstract FR:

L'hydrogenase de rhodobacter capsulatus est une enzyme a nickel et a fer qui, en oxydant l'hydrogene, permet a la bacterie de croitre en autotrophie. La synthese de l'hydrogenase est soumise a plusieurs niveaux de regulation. En absence de carbone organique l'enzyme est toujours synthetisee. En heterotrophie, l'expression des genes de structure de l'hydrogenase, les genes hupslc, a lieu seulement en presence d'h 2. La proteine hupr est un facteur de transcription essentiel a l'expression de l'operon hupslc. Des fusions traductionnelles phups : : lacz ainsi qu'une etude in vitro de la fixation de la proteine hupr purifiee au promoteur de hups ont montre que le regulateur se fixe sur une seule sequence palindromique, ttg-n 5-caa, en position -162/-152 nt du site d'initiation de la transcription. Hupr est un regulateur de reponse de la sous-famille ntrc des systemes a deux composants et il interagit par transfert de phosphate avec la proteine histidine kinase hupt. Des experiences realisees avec des proteines huprd54 mutees confirment que l'aspartate 54 est bien le site de phosphorylation de la proteine. Nous avons mis en evidence les deux particularites du systeme a deux composants hupt/hupr. D'une part, le regulateur est actif a l'etat non phosphoryle et la phosphorylation l'inactive. En effet, les proteines mutees huprd54 ou huprnter restaurent le phenotype sauvage d'une souche hupr , en conditions d'activation de l'hydrogenase. D'autre part, le regulateur hupr active une arn polymerase a 7 0 et non a 5 4 comme c'est le cas generalement pour les regulateurs de reponse des systemes a deux composants. La regulation de la synthese de l'hydrogenase en reponse a l'h 2 fait aussi intervenir l'hydrogenase regulatrice hupuv. Afin de reconstituer in vitro cette cascade de regulation, nous avons surproduit et purifie les proteines hupuv sur colonne d'affinite, mais elles etaient inactives. Le systeme de regulation global regb/rega est implique dans la repression de la synthese de l'hydrogenase. L'action du systeme regb/rega se superpose a celle du systeme specifique hupt/hupr. L'objectif est donc maintenant de comprendre comment se font les interactions entre les diverses proteines fixees au promoteur phups (hupr, ihf, rega et la polymerase a 7 0). Il faudra notamment preciser comment hupr active la polymerase a facteur 7 0 et comment rega reprime la synthese de l'hydrogenase.