thesis

Etude cristallographique de l'hydrogénase à fer de la bactérie sulfato-réductrice Desulfovibrio Desulfuricans ATCC 7757

Defense date:

Jan. 1, 2001

Edit

Disciplines:

Authors:

Abstract EN:

Pas de résumé disponible.

Abstract FR:

Les hydrogenases sont des metalloproteines qui catalysent la reaction reversible d'oxydation de l'hydrogene selon la reaction : h 2 2h + + 2e. Il existe deux classes d'hydrogenases qui se distinguent par leur contenu metallique et leurs proprietes enzymatiques. Ce sont les hydrogenases a nife et a fe. La premiere classe est la plus etudiee a ce jour et la structure de l'hydrogenase a nife de d. Gigas a ete resolue au laboratoire en 1995. Par la suite, de nombreux travaux ont pu mettre en evidence la structure du site actif dans differents etats redox ainsi que l'existence de cavites specifiques pour l'acces du substrat au site actif enfoui. Par contre, peu de resultats concernaient les hydrogenases a fe. Il etait cependant connu que le site actif correspondait a un centre fes d'un type nouveau. Nous avons donc entrepris de resoudre la structure de l'hydrogenase a fe de d. Desulfuricans par cristallographie en utilisant la methode mad. Cette technique nous a permis d'obtenir un modele a 1,5 a de resolution. Nous avons ainsi obtenu la structure du site actif qui est un centre fes compose de deux atomes de fer lies a des cn et co. Ces deux atomes de fer sont relies par une petite molecule organique. L'analyse de cette structure nous a permis de proposer cette molecule comme une dithiomethyle amine qui participerait au clivage de l'hydrogene. Nous avons aussi mis en evidence l'existence de chemins specifiques pour le substrat et les produits de reaction. Notre etude a aussi conduit a la caracterisation de l'etat reduit de l'enzyme riche en informations quant au mecanisme reactionnel. Ces resultats semblent indiquer des ressemblances entre les deux classes d'hydrogenases et nous ont permis de refaire, a la lumiere de la structure du site actif, une synthese des donnees spectroscopiques disponibles. Enfin, lors de ces travaux, nous avons resolu un probleme d'empilement variable des molecules dans les differents cristaux qui conservent les memes parametres de maille.