Abstract FR:

Les rotavirus sont l'une des causes majeures des gastro-enterites severes chez les enfants en bas ages. Ces virus appartiennent a la famille des reoviridae, ils sont d'allure spherique, non-enveloppes, possedent les symetries icosaedriques et leur genome est compose de 11 doubles brins d'arn (arndb). La capside de rotavirus est constituee de trois couches proteiques concentriques entourant le genome et deux enzymes virales vp1 et vp3. La couche externe se dissocie du virion lors de l'entree de celui-ci dans la cellule hote. La particule qui se retrouve dans le cytoplasme est alors appelee dlp (double layered particle). Le dlp transcrit les arndb viraux en arn messager (arnm) en utilisant son propre complexe de transcription, compose des proteines vp1, vp2, vp3 et vp6. Les arnm produits sortent du dlp par les canaux situes au niveau des axes de symetrie icosaedrique d'ordre 5. L'utilisation d'anticorps monoclonaux - ou simplement de fragments fabs - diriges contre vp6 permet, pour certains anticorps, d'inhiber la transcription. Nous avons utilise la cryomicroscopie electronique (cme) et les techniques de reconstruction 3d de virus icosaedriques pour etudier les interactions entre le dlp de rotavirus et trois fabs differents : le fab 238 - inhibiteur - et les fab 133 et 138 - non-inhibiteurs. Nous avons compare les structures 3d, calculees a 23a, des trois complexes dlp/fab. A la surface du dlp, la disposition des fabs 133 et 238, et dans une moindre mesure le fab 138, est sujette aux encombrements steriques lies a la proximite des sites antigeniques. Ces derniers ne sont donc occupes que partiellement. En comparant les diametres d'ouverture du canal de sortie de l'arnm pour les differents complexes, et en tenant compte des taux d'occupation des fabs, nous avons montre que l'inhibition n'est pas due a une obstruction de ce canal. Puis nous avons place les structures cristallographiques de vp6, d'un fab et du complexe vp6/fab 238 dans les cartes cme des trois complexes dlp/fabs. Nous avons developpe des outils pour affiner les positions et nous avons determine les zones d'interaction entre vp6 et les fabs 133 et 138. La structure atomique de vp6/fab 238 a servi de modele pour valider nos methodes d'affinement. Le fab 238 lie deux monomeres de vp6, alors que les fabs 133 et 138 ne sont en interaction qu'avec un seul monomere. Nous suggerons, d'apres ces resultats, que le fonctionnement de la transcription necessite un changement de conformation de vp6 et que celui-ci est inhibe par l'attachement du fab 238. Pour verifier cette hypothese, nous avons debute des experiences de proteolyse menagee du dlp par la proteinase k, en presence ou non des reactifs necessaires a la transcription. Les resultats preliminaires semblent indiquer qu'il y a des differences entre la proteolyse du dlp actif et inactif. Ces differences peuvent provenir d'un changement d'accessibilite d'une ou plusieurs proteines virales, traduisant un changement de conformation.