Abstract FR:

Le travail presente dans cette these est centre sur l'analyse de la reconnaissance moleculaire des proteines, avec comme systeme d'etude l'interaction antigene-anticorps. Nous avons choisi une approche originale qui consiste a mesurer l'effet de modifications de la region charpente des anticorps, distantes du site d'interaction avec l'antigene, sur leur fonction de reconnaissance. Nous avons cible deux zones de la charpente : l'interface vh-vl en raison de son influence potentielle sur la geometrie du paratope et les charges en surface pour leur role eventuel sur l'etape initiale de la reconnaissance. Afin d'evaluer la dependance de nos resultats au contexte moleculaire, des positions similaires dans differents anticorps ont ete mutees et nous avons mesure l'effet de ces mutations par la technologie biacore. Au prealable a nos travaux d'ingenierie des anticorps, nous avons mis en evidence la capacite de l'analyse globale des donnees issues du biacore a discriminer de facon fiable entre differents modeles d'interaction, a partir de donnees experimentales provenant de systemes d'interaction simples et complexes. Nous avons demontre que : (i) des mutations de la region charpente provoquent une modification des proprietes fonctionnelles des fragments d'anticorps et peuvent alterer leur niveau de production chez e. Coli ; (ii) l'amplitude des alterations des parametres cinetiques est faible (iii) la combinaison des mutations ayant des effets implique que la plupart de ces residus ne sont pas independants ; (iv) les constantes de vitesse d'association sont preferentiellement affectees par des suppressions de charge en surface des molecules ; (v) des modifications de l'interface provoquent des alterations des constantes de vitesse de dissociation. Ces etudes mettent en evidence le role fonctionnel de residus situes a distance du site d'interaction sur la fonction de reconnaissance. A long terme, ces travaux pourraient etre utilises de facon a modifier de maniere predictive les cinetiques de reconnaissance entre proteines.