Abstract FR:

Cette thèse présente l'étude de certains aspects de la dynamique conformationnelle de la sous-unité β₂ de la tryptophane synthase (L­ serine hydro-lyase (adding indole) EC 4. 2. 1. 20) et en particulier, les modulations induites par deux ligands : le pyridoxal-5'-phosphate et la sous-unité α, tous deux nécessaires pour l'activité de l'enzyme. Deux types d'approches ont été mises à profit : - La première est fondée sur les propriétés de fluorescence intrinsèque de la protéine β₂ et son atténuation par l'acrylamide. Cette méthode a permis la mise en évidence d'un changement de conformation induit par le pyridoxal-P dans le domaine N-terminal de la chaine β. - La seconde approche met à profit les propriétés immunogéniques et antigéniques de la protéine. Des anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine dénaturée ont été utilisés pour estimer l'aptitude de la protéine native à se dénaturer spontanément et réversiblement et mettre ainsi en évidence les effets stabilisants exercés par le pyridoxal-P et la sous-unité α. Un anticorps monoclonal obtenu par immunisation avec la protéine native et reconnaissant sélectivement un état non natif de celle-ci a été utilisé pour caractériser quantitativement un mode dynamique particulier de β₂. L'étude cinétique et à l'équilibre de l'interaction entre cet anticorps et β₂ a montré que ce mode dynamique correspond à la dissociation de l'enzyme en monomères β et de déterminer la constante d'équilibre de cette dissociation. Cette constante a été trouvée égale à 5 x 10-8 M.