Contribution à l’étude de l’embryogenèse somatique directe à partir de protoplastes d'Helianthus annuus L.
Institution:
Paris 11Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Developing tissue culture for Helianthus annuus L. Provides new options for gene or organelle transfer to overcome natural sterility barriers and producing new nucleo-cytoplasmic combinations. Ln order to introduce genes by direct gene transfer or by protoplasts fusion we developed a protoplast culture. Cell division has been obtained from hypocotyl protoplasts of Helianthus annuus and leave protoplasts of Helianthus petiolaris. The addition of agarose to the protoplast culture medium was an absolute requirement for substaining cell division and microcalli formation. Hypocotyls protoplasts gave rised to embryoid like-structures similar to those observed in hypocotyl liquid cultures. Ln the resultant culture a mixed population of calli and proembryoid structures was noticed. Factors affecting the developmental pattern of embryogenesis from protoplats are studied. The frequeny of embryoid like-structure formation reached 30 % of the total plated protoplasts when they are cultivated in a solidified medium supplemented with BAP (4,4 μM) et de l'ANA (5,4 μM). For sunflower, embryogenesis occurs from hypocotyl protoplasts, indicating that cells when converted to protoplasts are potentially responsive to redetermination via embryogenesis.
Abstract FR:
Le développement des cultures de tissus d'Héliantus annuus contribue à l'élargissement de la variabilité génétique disponible pour l'amélioration de cette espèce. Dans le but d’introduire des gènes par transformation directe ou par fusion nous avons défini une technique de culture des protoplastes. Des divisions ont été obtenues à partir de protoplastes d'hypocotyles d'Hélianthus annuus de différentes variétés cultivées et de protoplastes de feuilles d'Hélianthus pétiolaris. Différents facteurs qui conditionnent la division des colonies cellulaires, sont étudiés. Parmi ceux-ci, la gélification du milieu de culture avec de l'agarose s’est avéré indispensable pour le maintien des divisions et l'obtention de cals. L'évolution des protoplastes d'hypocotyles de tournesol conduit à observer simultanément la formation de structures proembryoides et de microcals après 21 jours de culture. Ces structures proembryoides sont identiques à celles obtenues dans des cultures d'hypocotyles en milieu liquide. Plusieurs paramètres favorisant la formation de ces structures sont précisés. Le pourcentage maximum de protoplastes, qui donnent naissance à des structures proembryoides, est de 30% dans un milieu solidifié par de l'agarose (sigma 0,7%) et contenant de la BAP (4,4 μM) et de l'ANA (5,4 μM). L'obtention d'une embryogénèse directe à partir de protoplastes d'hypocotyle, indique que les cellules sont capables d'exprimer leurs potentialités embryogènes même après digestion de la paroi.