Mobilisation du calcium et des canaux mecano-sensibles dans la regulation du volume des cellules epitheliales : lignee cellulaire de rein d'amphibien (cellules a6) et culture primaire de branchies de poisson
Institution:
Rennes 1Disciplines:
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Un choc hypotonique provoque dans les cellules a6 (lignee cellulaire de rein d'amphibien) un gonflement cellulaire suivi d'une augmentation transitoire de la concentration intracellulaire de calcium. Des etudes precedentes montrent que ce pic de ca#2#+ agit sur la regulation du volume en activant la sortie de kcl necessaire a la perte d'eau. Le but de ce travail de these est d'etudier les mecanismes impliques dans l'augmentation de la concentration intracellulaire de calcium apres un choc hypotonique. Plusieurs approches methodologiques (mesure du volume, de la concentration intracellulaire de calcium par fluorescence et analyse electrophysiologie de canaux ioniques par la technique patch-clamp) nous ont permis de montrer que l'augmentation de la concentration intracellulaire de calcium dans les cellules a6 etait due a l'entree de ca#2#+ et a la mobilisation de reserves calciques. L'entree de ca#2#+ est effectuee par un canal mecanosensible (scaa selectif pour le calcium dans les conditions physiologiques. Ce flux entrant de ca#2#+ par le canal sca alors d'un gonflement cellulaire active la mobilisation des reserves calciques sensibles a la thapsigargine. Une partie de ces reserves peut etre aussi mobilisee par un mecanisme mecano-sensible et independant du calcium externe. En comparaison avec les cellules renales d'amphibien, les cellules branchiales de poissons representent un modele interessant pour l'etude de la regulation du volume. Les difficultes d'aborder in vivo l'etude de cette regulation nous ont conduit a mettre au point une technique de culture primaire de branchies de truite. Tout comme les cellules a6, les cellules branchiales exposees a un choc hypotonique gonflent puis regulent leur volume, et la dilution du milieu externe provoque une augmentation de la concentration intracellulaire de calcium. Meme si cette montee de calcium est due, comme pour les cellules a6, a une entree de ca#2#+ et a une mobilisation des reserves calciques, les mecanismes mis en jeu apparaissent differents.