Abstract FR:

L'endocytose est le terme employe pour definir le processus biologique qui permet a une cellule d'internaliser du materiel extra-cellulaire dans des vesicules derivees de sa propre membrane plasmique. L'amibe dictyostelium discoideum est un modele particulierement adapte a ce type d'etude puisque c'est par l'endocytose qu'elle assure sa fonction vitale de nutrition. A ce jour, certaines proteines jouant un role dans le trafic endocytaire ont deja ete caracterisees, mais cette liste est loin d'etre exhaustive. Mon travail de these a consiste a purifier le compartiment endocytaire de l'amibe afin de caracteriser et identifier les proteines qui lui sont associees. L'obtention de materiel de tres grande purete reste une difficulte majeure pour l'etude des proteines associees aux compartiments subcellulaires. Une technique, appelee fractionnement magnetique, a ete adaptee de la litterature afin d'isoler des vesicules d'endocytose de tres grande purete. Les proteines associees a ces vesicules sont peu abondantes puisqu'elles representent au total moins de 1% (masse/masse) des proteines totales de la cellule. Une analyse par electrophorese sur gel d'acrylamide revele la presence d'au moins une centaine de proteines. Des sequences proteiques partielles ont ete obtenues par microsequencage a partir d'une vingtaine de proteines majeures. Parmi celles-ci, une recherche d'homologie de sequence dans les banques de donnees a permis d'identifier et parfois de donner les premieres informations de sequences sur: une proteine de la famille des petites proteines g (rab 7) ; cinq sous unites de l'atpase a protons de type vacuolaire ; une protease a cysteine et une protease de type cathepsine d ; l'actine ; une proteine de 25kda dont le role et la localisation sont encore a l'etude