Abstract FR:

Nous avons etudie les proprietes structurales et dynamiques des proteines pour trois systemes biologiques differents a l'aide de methodes de spectroscopie optique. Dans un premier temps, nous avons analyse la mobilite de la boucle contenant la sequence rgd de l'echistatine et de certaines molecules analogues par fluorescence a l'etat stationnaire associee a des experiences de quenching. Certaines distances intramoleculaires ont pu etre determinees lors d'experiences de transfert d'energie de fluorescence. Nous avons obtenu des informations importantes sur la mobilite de la boucle rgd exposee par l'etude de l'anisotropie de fluorescence a l'etat stationnaire associee a des experiences de quenching, qui indique une mobilite beaucoup plus reduite que ce qui a ete decrit a ce jour. Dans un deuxieme temps, nous avons etudie l'effet de la fixation du calcium sur la structure de la calmoduline par fluorescence resolue dans le temps et decay d'anisotropie de fluorescence. Nous avons utilise cinq mutants tryptophane distincts afin de suivre chacun des quatre sites calcium ainsi que la jonction centrale reliant les deux lobes de la molecule. L'analyse de la fluorescence de ces mutants confirme l'hypothese d'une fixation sequentielle du calcium. Les temps de relaxation en rotation indiquent que la fixation du calcium entraine des changements de forme au niveau des deux lobes plutot que de l'ensemble de la proteine, et suggerent pour la zone de jonction une flexibilite plus importante que celle trouvee par diffraction des rayons x. Dans un troisieme temps, nous avons etudie la structure des sous-unites de la caseine kinase 2 (ck2) et leur interaction. Des donnees de dichroisme circulaire indiquent que les deux sous-unites presentent des differences structurales, contrairement a certaines predictions basees sur la sequence en acides amines. Par rapport aux sous-unites separees, la reconstitution de la forme holoenzyme active conduit a une augmentation significative du contenu en helice alpha ainsi que de la thermostabilite, ce qui souligne l'importance de l'interaction entre sous-unites pour la stabilite et la fonction de cet enzyme. Cette etude montre clairement le potentiel des methodes de spectroscopie optique pour l'analyse de la mobilite des proteines et des interactions proteine-proteine