Embryogenèse somatique chez l'orge (Hordeum vulgare L. ) : application aux cultures de cellules et de protoplastes
Institution:
Paris 11Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
This study deals with experiments about callogenesis and morphogenie potential of barley (Hordeum Vulgare L. ) tissue cultures. In this purpose, different genotypes and explants have been studied. The effect of medium composition has been also investigated. From immature embryo explants, high rates of callogenesis and in vitro plant regeneration has been obtained. Strong genotypic and medium composition effects have been also noticed on rate of callogenesis, type of callus and in vitro regenerative ability. Histological examinations of callus tissues have shown cellular proliferation primarily originating from the scutellum of young embryos. Subsequent differentiation of callus led to the formation of somatic embryos which have been histologically characterized. Organogenesis (root and apical meristem) was also obvious. For initiation of barley cell suspensions, pieces of embryogenie calluses have been selected. After dissociation and filtration procedures, rapidly growing and homogeneous cell lines which consisted of highly-cytoplasmic rich cells, have been obtained. In a third step, investigations on protoplast culture have been carried out with callus and suspension materials. Only cell suspension in exponential growth stage was suitable for protoplast culture. The isolated protoplasts were able to divide and produced numerous microcolonies which have developed into well growing indifferentiated calluses. Plating efficiency was also greatly affected by enzymatic solution composition. The use of this in vitro system in genetic manipulations such as transformation experiments is discussed
Abstract FR:
L'étude du potentiel de régénération de plantes des cultures de tissus d'orge(Hordeum vulgare L. ) a fait l’objet de la première partie de ce mémoire. L'expérimentation a porté d’une part sur le choix de l'explant (origine développement) et d'autre part sur les conditions de culture (composition du milieu de culture). Des cals présentant un pouvoir élevé de néoformation de plantes ont été obtenus à partir d'embryons immatures. Le potentiel de régénération de plantes dépend du génotype, du milieu de callogénèse ainsi que de la durée de culture in vitro. Une étude histologique à permis de localiser au niveau du scutellum des embryons immatures les centres de prolifération cellulaire et de caractériser le mode de néoformation (embryogenèse somatique et organogenèse). L'étudedes conditions d'établissement de suspensions cellulaires est présentée dans la seconde partie. Les suspensions cellulaires isolées par dissociation et filtration de cals embryogènes se sont révélées non morphogènes. L'utilisation de suspensions cellulaires a permis l'obtention: populations de protoplastes aptes à se diviser. Les conditions isolement de protoplastes influent sur le taux de formation microcolonies. Leur culture a conduit à la formation microcolonies qui se développent jusqu'au stade cal indifférencié. L'utilisation de ces techniques de culture in vitro est discutée dans le cadre des manipulations génétiques telles les transformations dans le contexte des Graminées et notamment, des céréales.