Influence des conditions de culture sur les propriétés de transport des pneumocytes de rat
Institution:
Paris 5Disciplines:
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Abstract FR:
Le transport transépithélial de Na+ par l'épithélium alvéolaire de rat s'effectue côté apical à travers des canaux Na+ et un cotransport Na+ - glucose et côté basolatéral par la Na+, K+-ATPase. Le cotransport disparaît en culture sur plastique , peut-être du fait de la dérive des pneumocytes (Pn) vers le phénotype de type I. Nous montrons par RT-PCR que l'ARNm de l'isoforme SGLT1 de ces cotransporteurs le seul exprimé significativement, diminue fortement (90%) en culture sur plastique. En ce qui concerne le transport facilité de glucose, les ARNm de GLUT1 (et non GLUT2), GLUT4, GLUT5 ont été détectés dans les Pn fraîchement isolés. L'ARNm de GLUT1 diminue de 50% en culture et ceux GLUT4 et GLUT5 de plus de 80% Les Pn cultivés à l'interface air-liquide (A-L) ont un phénotype mieux préservé, qui se traduit par une importante augmentation de l'ARNm des apoprotéines du surfactant mais pas par celle des ANRm des transporteurs de glucose. Il a été suggéré que A-L agit par un meilleur apport d'O2. Nous avons réévalué les besoins en O2 des Pn en développant une méthode originale de mesure de leur consommation d'O2 en milieu ouvert qui ne nécessite pas leur décollement du support. Cette méthode a été validée et a permis de montrer que les Pn ne sont pas privés d'O2 dans nos conditions de culture. Nous avons évalué les effets d'une agitation tridimensionnelle qui a été proposée comme méthode de création d'A-L, sur les propriétés de transport des Pn. Nous avons observé qu'elle augmentait sensiblement l'activité de leur Na+, K+-ATPase, sans augmenter son expression, ni celle du canal Na+, ou celle des protéi͏̈nes du surfactant. L'utilisation d'inhibiteurs suggère que cette augmentation serait due à une activation de la PI-PLC et de la PKC, comme cela est observé chez différents types de cellules soumises à un stress mécanique. Les Pn possèderaient donc des éléments de transduction des contraintes de cisaillement, comme les cellules endothéliales.