Etude d'un phénomène apoptotique induit par la 1,25 r-dihydroxyvitamine D3 dans le gliome C6 du rat
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1,25-dihydroxyvitamin d3 (1,25-d3) is the active metabolite of vitamin d. Its differentiating and/or antiproliferative effects are used in the treatment of breast and prostate cancers. Its genomic action is mediated by its binding to a nuclear receptor, vdr (vitamin d receptor), which exerts transcriptional effects on many genes. Glial tumours still have a very poor prognosis. Some express vdr and 1,25-d3 can exert a toxic effect on cells from rat or human gliomas. This work focuses on the characterisation of the death induced by this hormone in a line called c6. 9, derived from the rat c6 glioma. A 24 h treatment with 10 7 m of 1,25-d3 induces after 6 days, the death of c6. 9 cells. This phenomenon is apoptosis because it requires protein neosynthesis, and is accompanied by internucleosomal fragmentation and the activation of several genes known to be involved in apoptotic phenomena. Our results show that the environment of the treated cells is important, as we were able to demonstrate that a variation of the ampc level in c6. 9 cells could inhibit the lethal process induced by 1,25-d3. Furthermore, we were able to demonstrate that the level of DNA methylation in treated cells also alters the susceptibility of c6. 9 cells to 1,25-d3, as demethylation inhibits the lethal phenomenon. The development of suppressive subtractive libraries at 8 h and 3 days after the onset of 1,25-d3 treatment allowed the characterisation of genes whose expression is increased during the apoptosis process. Some of these cDNAs, still under study, do not correspond to any known sequence. Three genes specify proteins involved in the endosomal-lysosomal system or cell adhesion. These data suggest that modifications of major cellular functions are involved in the completion of the apoptosis process.
Abstract FR:
La 1,25-dihydroxyvitamine d3 (1,25-d3) est le métabolite actif de la vitamine d. Ses effets différenciants et/ou antiprolifératifs sont utilisés dans le traitement des cancers du sein et de la prostate. Son action génomique passe par sa liaison a un récepteur nucléaire, le vdr (vitamin d receptor) qui exerce des effets transcriptionnels sur de nombreux gènes. Les tumeurs gliales ont un pronostic encore très défavorable. Certaines expriment le vdr et la 1,25-d3 peut exercer un effet toxique sur des cellules issues de gliomes de rat ou d'homme. Ce travail porte sur la caractérisation de la mort induite par cette hormone dans une lignée appelée c6. 9, dérivée du gliome c6 de rat. Un traitement de 24 h par 10 7 m de 1,25-d3 induit après 6 jours, la mort des cellules c6. 9. Ce phénomène est une apoptose car il nécessite une néosynthèse protéique, et s'accompagne d'une fragmentation internucléosomale et de l'activation de plusieurs gènes connus pour être impliques dans des phénomènes apoptotiques. Nos résultats montrent que l'environnement des cellules traitées est important, car nous avons pu démontrer qu'une variation du taux d'ampc dans les cellules c6. 9 pouvait inhiber le processus létal induit par la 1,25-d3. Par ailleurs, nous avons pu démontrer que le niveau de méthylation de l’ADN des cellules traitées modifie également la susceptibilité des cellules c6. 9 a la 1,25-d3, car une déméthylation inhibe le phénomène létal. L'élaboration de banques soustractives suppressives à 8 h et 3 jours après le début du traitement par la 1,25-d3 a permis de caractériser des gènes dont l'expression est accrue au cours du processus d'apoptose. Certains de ces ADNc, encore l'étude, ne correspondent a aucune séquence connue. Trois gènes spécifient des protéines impliquées dans le système endosomal-lysosomal ou l'adhésion cellulaire. Ces données suggèrent que des modifications de fonctions cellulaires majeures sont impliquées dans l'accomplissement du processus d'apoptose.