thesis

Dynamique, evolution et expression de genomes de bacteries lactiques : cas du metabolisme des pyrimidines chez lactobacillus plantarum ccm 1904

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Jan. 1, 2000

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Lactobacillus plantarum est une bacterie lactique utilisee pour diverses fermentations dans l'industrie agro-alimentaire. Malgre la grande taille de son genome, la souche ccm 1904 est auxotrophe pour de nombreux acides amines et vitamines ; elle est cependant prototrophe pour les pyrimidines. Par sa grande diversite d'organisations genomiques, le metabolisme des pyrimidines constitue un modele interessant pour l'etude de la dynamique et de l'evolution des genomes. Chez plusieurs bacteries gram positives, les genes intervenant dans la biosynthese de novo des pyrimidines sont organises en un grand operon pyrr-p-b-c-aa-ab-k-db-f-e. Mais l'operon pyr de l. Plantarum est incomplet : pyrr-b-c-aa-ab-db-f-e. Par ailleurs, les bacteries lactiques possedent un second gene pyrd distinct (pyrda) ; pyrda et pyrdb codent chacun une dihydro-orotate deshydrogenase fonctionnelle. Les travaux realises au cours de cette these ont permis de mettre en evidence plusieurs originalites propres a l. Plantarum : - l'existence d'un gene pyrd unique, de type b. La construction d'un mutant delete du gene pyrdb par mutagenese dirigee par pcr a conduit a l'obtention d'une souche auxotrophe pour les pyrimidines. Le gene pyrda aurait ete perdu par adaptation a de nouvelles niches ecologiques ou sa presence n'est pas indispensable ; - l'absence du gene pyrk codant une sous-unite de la dihydro-orotate deshydrogenase b. Son absence pourrait etre liee a la non-utilisation du fer par les lactobacilles ; - le groupement, ailleurs sur le chromosome, des genes upp (uracile phosphoribosyltransferase) et pyrp (uracile permease) intervenant dans la voie de sauvetage de l'uracile. Cette situation pourrait correspondre a un deplacement recent du gene pyrp hors de l'operon pyr. De plus, l'etude de mutants de regulation construits par mutagenese dirigee par pcr a permis de montrer que l'expression de l'operon pyr est regulee par attenuation transcriptionnelle mediee par la proteine pyrr.