Abstract FR:

L'acide amine la p-benzoyl-l-phenylalanine, (p-bz)phe, a ete incorporee dans la substance p (sp), arg-pro-lys-pro-gln-gln-phe-gly-leu-met-nh2 pour localiser son domaine de liaison dans le recepteur neurokinine-1 (nk-1) humain, surexprime dans une lignee cellulaire de mammiferes transfectee. L'agoniste specifique du recepteur nk-1, la pro9sp, a ete modifie en position 8 par (p-bz)phe et acyle a l'extremite n-terminale par une molecule de biotine sulfone via un bras 5-aminopentanoyl. Apres irradiation et fragmentation du recepteur lie covalemment au peptide biotinyle, le groupe biotine sulfone permet d'extraire les fragments biotinyles du milieu complexe d'incubation par des billes magnetiques de streptavidine. Une elution directe des billes par la matrice utilisee en spectrometrie de masse (desorption-ionisation par laser assistee par matrice, ou maldi-tof ms) et une analyse maldi permet l'identification des fragments du recepteur nk-1 marque. Une digestion par la trypsine combinee a une digestion par l'endoproteinase glu-c a etabli que le site d'attachement covalent de la sp photoactivable se trouvait dans la deuxieme boucle extracellulaire, thr173-arg177. Une fragmentation au bromure de cyanogene a montre que la sonde etait liee covalemment au groupe methyl d'un residu methionine. Ainsi, ces experiences ont montre que la methionine 174 etait le residu modifie