Abstract FR:

L'objet de ce travail est l'utilisation d'immunoconjugues obtenus par voie genetique dans des dosages immunoenzymatiques relatifs au diabete. Dans un premier temps, nous avons construit le gene de synthese de la proinsuline humaine que nous avons insere dans le gene de la phosphatase alcaline bacterienne. La proteine hybride produite chez escherichia coli a partir de cette construction a ete caracterisee. Elle est homogene, stable et bifonctionnelle. L'activite enzymatique du domaine phosphatase alcaline est conservee et les proprietes antigeniques du domaine proinsuline vis-a-vis de differents anticorps anti-insuline ont ete determinees. Nous avons utilise cette proteine hybride comme traceur immunoenzymatique pour developper un dosage d'insuline par competition. La sensibilite obtenue est similaire a celle d'un dosage commercial mais le temps de revelation est important en raison de la faible activite specifique de la phosphatase alcaline bacterienne (phoa). L'utilisation de mutants de phoa a permis de surmonter ce probleme en reduisant jusqu'a un facteur 6 le temps necessaire a l'obtention d'un signal mesurable. Des etudes preliminaires ont ete egalement effectuees sur le dosage des anticorps anti-insuline a l'aide soit d'un traceur recombinant proinsuline-phoa, soit d'un traceur recombinant anticorps-phoa. Ces travaux permettent de mieux apprehender les atouts de ces nouveaux conjugues dans une perspective de developpement industriel