Abstract FR:

Les leptospires sont des eubacteries spiralees et mobiles. Comme toutes les bacteries du phylum des spirochetes, les leptospires possedent des endoflagelles, responsables de leur mobilite et un peptidoglycane associe a la membrane cytoplasmique. La penicilline, principal antibiotique dans le traitement des leptospiroses, inhibe l'activite des enzymes responsables des etapes finales de la synthese du peptidoglycane, les proteines liant la penicilline (pbp). Le marquage specifique des pbps a mis en evidence 6 pbps chez deux souches pathogenes de leptospires. Nous nous sommes interesses aux genes pona (pbp1) et pbpb (pbp3) de ces deux souches. Chaque gene, transcrit comme une unite de transcription independante, determine une proteine possedant tous les motifs des pbps de haut poids moleculaire et ancree dans la membrane interne. Les produits des genes pona et pbpb fixent de facon specifique l'ampicilline, demontrant ainsi qu'il s'agit veritablement de proteines fixant la penicilline. Pour mettre au point la mutagenese par echange allelique, nous avons choisi d'inactiver un gene de flagelline dans une souche saprophyte. Le gene flab interrompu par le gene de resistance a la kanamycine d'enterococcus faecalis, a ete irradie aux ultraviolets ou denature avant electroporation. Parmi les clones resistants, seulement 5 a 10% sont issus d'un echange allelique au locus flab. Pour une selection efficace de ces derniers, nous avons utilise le marqueur de contre selection rpsl. L'observation des mutants flab- montre que l'endoflagelle est implique dans la mobilite et dans la morphologie des extremites de la bacterie. Ils demontrent aussi la faisabilite de l'echange allelique chez les leptospires saprophytes. Nous avons egalement mis