Abstract FR:

Nous avons etudie la detection de l'antibiotique polyenique l'amphotericine b par la diffusion raman resonante exaltee de surface (serrs). Cette etude consiste tout d'abord a definir les conditions optimales de detection de l'antibiotique par serrs dans des solutions colloidales d'argent : le choix de la longueur d'onde excitatrice, la nature et la concentration des electrolytes et les modes de preparation des colloides d'ag. De cette maniere, nous avons detecte l'amb et son derive ame a l'etat de traces (10#-#1#0 m dans le colloide cr pour l'amb et 10#-#9 m dans le colloide l-m pour l'ame). Une etude complementaire de l'amb realisee par dichroisme circulaire en presence de colloide d'ag suggere une modification dans la structure des especes auto associees. La deuxieme partie de ce travail consiste a detecter et quantifier l'amphotericine b libre dans le plasma sanguin. Nous avons etudie parallelement l'interaction amb/ldl et l'interaction amb/plasma par serrs et sers. Ce choix constitue une approche privilegiee de l'interaction amb/plasma puisque l'amb presente une affinite importante pour les lipoproteines (surtout les ldl). Dans une solution d'amb a 10#-#5 m et de 0,02 mg/ml de ldl, on ne retrouve que 0,1% de l'amb sous sa forme libre. Cette etude nous a egalement permis d'estimer les constantes d'associations (k) et le nombre de sites de fixation (na des systemes amb/ldl et amb/plasma (en privilegiant le cholesterol des ldl comme sites de fixation). Ces parametres presentent alors le meme ordre de grandeur (k 10#6 m#-#1 et n = 0,3). Nous nous sommes enfin interesses a la detection et a la localisation de l'amb intracellulaire par le microrr et le microserrs. Les cellules choisies sont des macrophages assurant l'internalisation du colloide d'ag. Dans les conditions experimentales utilisees, l'amb est detectee au niveau de la membrane plasmique par microrr. Par microserrs, l'amb est detectee dans les vacuoles. La faible reproductibilite de ces resultats est liee a la difficulte de maintenir l'activite sers du colloide en presence du milieu de culture cellulaire.