Abstract FR:

Les ribozymes sont des molecules d'arn qui sont capables de couper de facon catalytique des arn a des sites definis. Ils sont utilises pour inhiber specifiquement l'expression d'un gene ou le developpement d'un virus. Nous avons etudie l'activite d'un ribozyme en tete de marteau dans le cytoplasme des cellules hela infectees par un recombinant de virus de la vaccine exprimant la polymerase du phage t7, et cotransfectees avec deux plasmides exprimant chacun le ribozyme ou la cible (arn du vih-1, position +1 a +692) sous le controle d'un promoteur t7. Nous avons teste deux ribozymes de 181 nt (rz181) et 132 nt (rz132) contenant la sequence-coeur du ribozyme (35 nt). L'arn de 181 nt (rz181m) presente une mutation d'une base dans le coeur catalitique qui le rend inactive in vitro. Comme controle nous avons utilise le plasmide d'origine pet-3, exprimant un arn de 134 nt sans insert, ainsi que le prz181m exprimes en exces de 50 fois sur la cible, les ribozymes rz181 et rz132 diminuent le niveau de l'arn-cible du vih-1 present dans les cellules (mesure par rt-pcr), tandis que le ribozyme mute rz181m est sans effet, eliminant ainsi un effet antisense. Cependant, des mesures par rt-pcr competitive montrent qu'il faut un exces de 300 fois de ribozyme sur la cible pour obtenir une inhibition importante (85 %) de l'arn cible. Dans les memes conditions d'expression le rz181m presente un faible effet antisens. Le rz132 plus court, obtenu par une deletion de 49 nt de rz181, est plus active in vivo. Cependant, les rz181 et rz132 ne coupent pas in vitro une cible de 14-mer ou de 256 nt, alors qu'un miniribozyme de 35 nt est tres efficace.