Abstract FR:

Cette these decrit l'identification du mode d'action de molecules chimiques capables d'inhiber specifiquement la production d'apob-100 par les hepatocytes. La premiere partie du travail realisee sur les cellules hepg2 nous a permis de determiner que le gf 188777x agit pendant les premieres etapes necessaires a apob-100 pour etre synthetisee et transloquee dans la lumiere du reticulum endoplasmique. L'ic#5#0 est de 30 nm sur la production d'apob-100 apres 4 heures de traitement. La secretion des triglycerides et des esters de cholesterol neosynthetises est aussi inhibee avec la meme efficacite. Sur des hepatocytes primaires de rat, nous avons observe que la production d'apob-100 est inhibee avec une ic#5#0 de 0. 5 m, alors que celle d'apob-48 n'est pas affectee jusqu'a 20 m de gf 188777x. Dans une seconde partie, nous avons identifie la cible moleculaire de nos composes chimiques par photomarquage d'affinite avec le gf 181779x #1#4c. Nous avons determine que ce compose reconnait specifiquement la pdi (protein disulfide isomerase) presente dans le complexe mtp (microsomal triglyceride transfer protein). Le gf 181779x se lie a la pdi dans une region presentant une homologie avec le recepteur aux oestrogenes. Nous avons ensuite demontre que le gf 188777x est un inhibiteur reversible de la mtp, et qu'il n'entre pas en competition avec les triglycerides et les esters de cholesterol, les deux classes de lipides neutres preferentiellement transportes par la mtp. Dans une troisieme partie, nous avons etudie la secretion de formes humaines d'apob tronquees a l'extremite c-terminale, transfectees dans des cellules macardle. Nous avons observe que l'efficacite du gf 188777x est fortement correlee a la longueur de l'apob. L'ic#5#0 est de 40 nm sur la secretion d'apob-100, et de 2. 5 m sur la secretion d'apob-48. Cette selectivite de nos produits a ete observee in vivo chez le rat traite pendant 3 jours avec le gw 288958x, un compose plus puissant et actif in vivo. Le taux serique d'apob-100 est inhibee de 58% a une dose de 2. 5 mg/kg/jour, alors que l'apob-48 est affectee de facon marginale a la dose de 20 mg/kg/jour. Les taux circulants de ldl cholesterol et de triglycerides sont progressivement inhibes par des doses croissantes du gw 288958x.