Abstract FR:

Ce travail de these a porte sur la validation de procedures de transfert de genes in vivo dans un modele animal et sur le developpement et l'amelioration de systemes de transfert de genes. Nous avons demontre, chez le chien, la faisabilite du transfert de genes dans les cellules urotheliales, par instillation directe de surnageant retroviral dans la vessie, avec pour objectif le traitement de tumeurs superficielles developpees aux depens de l'epithelium vesical. Le transfert de genes retroviral s'est avere etre interessant, en termes de survie du vecteur en presence d'urine, d'infection des cellules urotheliales et d'expression du transgene au sein de ces cellules. La transduction des cellules de l'epithelium vesical s'est revelee stable. De plus, une transduction preferentielle des cellules tumorales a ete observee. L'efficacite moderee de la transduction limite pour l'instant l'utilisation therapeutique du transfert de genes, mais l'amelioration de cette efficacite est possible selon plusieurs axes comme l'optimisation des modalites d'administration ou encore l'adaptation du systeme vecteur. Le developpement d'un vecteur retroviral assurant une transduction et une expression des transgenes de facon efficace a donc egalement fait partie de ce travail de these. Un vecteur original a ete developpe au laboratoire. Des clones stables producteurs de ce vecteur portant un gene de selection conferant la resistance a la neomycine ont ete isoles, avec de tres hauts titres. Cependant, de nouvelles constructions avec le gene rapporteur <ss>-gal n'ont pas permis d'isoler de clones producteurs stables et a hauts titres. L'analyse de ces donnees nous a conduit a apporter les modifications necessaires a l'amelioration de l'expression du vecteur foch, tout en conservant ses capacites de transduction. Ceci a ete demontre avec un gene rapporteur codant pour la proteine a fluorescence verte (gfp), puis avec le gene neo. Des travaux sont actuellement en cours pour obtenir une expression ciblee du transgene dans les cellules epitheliales, en utilisant les elements activateurs et promoteurs du recepteur au facteur de croissance epithelial (egf-r).