Nanovectorisation de siRNA pour le traitement du cancer du sein triple négatif
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Abstract EN:
In order to improve the treatment of triple negative breast cancer (TNBC), the objectives of this work are: 1) to optimize the formulation of a siRNA nanovector (CS-MSN) functionalized by a cell penetrating peptide to increase its transfection efficiency and to obtain features compatible with a systemic administration, ii) to investigate its internalization mechanisms and pathways and its intracellular trafficking and iii) to validate its efficiency on a TNBC cell model. The optimization of CS-MSN formulation resulted in a nanovector with a size of about 170 nm with a slightly positive surface charge. CS-MSN showed an ability to protect siRNA against degradation in the presence of serum without remarkable cell toxicity. The entry of CS-MSN in cells is enhanced by the presence of the membranotropic peptide gH625 on their surface and involves a clathrin- and caveolae-mediated endocytosis pathway. CS-MSN showed an ability to escape degradation in endo-lysosomal vesicles, facilitated by the gH625 peptide. This endosomal escape results in 73% of inhibition of the GFP protein expression and a significant reduction of Bcl-xL mRNA and protein.
Abstract FR:
Dans l’optique d’améliorer le traitement des cancer du sein triple négatif (CSTN), les objectifs de ces travaux de thèse sont : 1) d’optimiser la formulation d’un nanovecteur de siRNA fonctionnalisé par un peptide membranotrope (CS-MSN) pour augmenter son efficacité de transfection et pour avoir des caractéristiques compatibles avec une administration par voie systémique, ii) étudier ses voies d’internalisation et son trafic et devenir intracellulaire et iii) valider son efficacité sur un modèle cellulaire de CSTN. L’optimisation de la formulation des CS-MSN a abouti à un nanovecteur d’une taille d’environ 170 nm avec une charge de surface légèrement positive. Les CS-MSN ont montré une capacité à protéger les siRNA contre la dégradation en présence du sérum sans toxicité remarquable sur les cellules. L’entrée des CS-MSN dans les cellules est augmentée par la présence du peptide membranotrope gH625 à leur surface et elle implique une voie d’endocytose médiée par les clathrines et par les cavéoles. Les CS-MSN ont montré une capacité à échapper à la dégradation par les vésicules endo-lysosomales, cet échappement étant facilité par la présence du peptide gH625. Cet échappement endosomal résulte en une inhibition de 73 % de l’expression de la protéine GFP et une réduction significative de l’ARNm et de la protéine Bcl-xL.